Transfert de gènes à médiation biolistique : technique permettant d’administrer un gène d’intérêt dans des cellules cibles via un pistolet à gènes biolistiques

Commencez avec un volume optimal de billes d’or - des véhicules de livraison de gènes biologiquement inertes et non toxiques - dans un tube de microcentrifugation. Ensuite, ajoutez des agents cationiques - spermidine et chlorure de calcium, suivis des fragments d’ADN souhaités aux perles d’or. Effleurez doucement le tube et incuber.

Le chlorure de calcium se lie aux fragments d’ADN et facilite leur enrobage sur les billes d’or via les résidus de spermidine. Ensuite, centrifugez et retirez le solvant. Remettre en suspension les billes enrobées d’ADN dans de l’éthanol. Pipetez doucement les billes sur un disque macroporteur stérile. Laissez sécher.

Mettre en place un appareil de canon à gènes biolistiques comprenant un tube d’accélération de gaz hélium et une chambre de bombardement avec un disque de rupture et un écran d’arrêt dans leurs fentes respectives. Ensuite, retournez le disque macroporteur et chargez-le sous le disque de rupture.

Par la suite, placez les cellules hôtes cibles cultivées dans un milieu solide approprié complété par du sorbitol - un stabilisant osmotique pour améliorer l’efficacité de la transformation. Une fois la configuration prête, tirez avec le pistolet à