Encyclopédie des expériences JoVE
Immunologie
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Commencez par un échantillon contenant un virus obtenu à partir d’une cornée porcine infectée traitée avec un médicament antiviral.
Effectuez une dilution en série de l’échantillon pour créer une séquence de concentrations virales décroissantes.
Une dilution optimale empêche l’infection unicellulaire par plusieurs virus.
Introduisez les échantillons dilués dans une monocouche de cellule hôte et incuberez.
Le virus se fixe au récepteur de la cellule hôte, pénètre dans la cellule et initie sa réplication. La cellule infectée lyse, libérant des virions.
Ajoutez de la méthylcellulose, une substance visqueuse qui confine les virus aux cellules voisines.
Par la suite, les virus provoquent la mort cellulaire et la formation de plaques dans la région infectée.
Ajoutez du méthanol pour fixer les cellules.
Utilisez du violet cristallin pour colorer les cellules vivantes.
Observez les plaques comme des zones claires indiquant les cellules infectées et la mort cellulaire, entourées de cellules non infectées colorées au violet cristallin.
Enfin, comptez le nombre de plaques à la dilution la plus élevée pour quantifier le titre viral dans la solution de départ afin de déterminer l’efficacité du
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