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Identifier les effets des mutations du gène BRCA1 sur la recombinaison homologue en utilisant les cellules qui expriment endogène de type sauvage du gène BRCA1
Journal JoVE
Biologie
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Journal JoVE Biologie
Identifying the Effects of BRCA1 Mutations on Homologous Recombination using Cells that Express Endogenous Wild-type BRCA1
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Identifier les effets des mutations du gène BRCA1 sur la recombinaison homologue en utilisant les cellules qui expriment endogène de type sauvage du gène BRCA1

DOI:
10.3791/2468-v

•

08:53 min

•

February 17, 2011

•

, ,
1Department of Biomedical Informatics,The Ohio State University, 2Departments of Molecular Immunology and Clinical Oncology,Tohoku University

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 02:01Preparation of Cell Line with an Integrated Recombination Substrate
  • 03:04Transfection to Deplete Endogenous BRCA1 and add back Mutant BRCA1
  • 05:19Analysis of Transfectants
  • 06:07Analysis of the Effects of BRCA1 Mutations on Homologous Recombination via GFP-Expression
  • 07:54Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Nous fournissons une méthode pour tester des variantes du gène BRCA1 dans un essai de culture de tissus basées pour la réparation recombinaison homologue des dommages à l'ADN en appauvrissant protéine BRCA1 endogène à partir d'une cellule à l'aide d'ARNi et le remplacer par un mutant BRCA1 points qui contient un changement de codage.

Tags

BRCA1 MutationsHomologous RecombinationEndogenous BRCA1Missense MutationsFunctional AnalysisCell LinesRNAi TargetingBRCA1 MRNABRCA1 VariantAcute SilencingSecondary MutationsCompensation For Loss Of FunctionHeLa-derived Cell LineHomologous Recombination AssayRecombination SubstrateI-SceI Restriction Enzyme SiteGFP Allele

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