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Mutagênese e Funcional Protocolos de Seleção para a Evolução Dirigida de proteínas em E. coli</em
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Biologie
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Journal JoVE Biologie
Mutagenesis and Functional Selection Protocols for Directed Evolution of Proteins in E. coli

Mutagênese e Funcional Protocolos de Seleção para a Evolução Dirigida de proteínas em E. coli</em

DOI:
10.3791/2505-v

•

09:01 min

•

March 16, 2011

•

, , , ,
1Department of Microbiology & Environmental Toxicology,University of California Santa Cruz – UCSC

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 01:38Creation of a Mutant Library: Mutagenesis
  • 03:23Creation of a Mutant Library: Readout
  • 04:03Mutant Identification and Characterization: Construction of Gradient
  • 05:06Mutant Identification and Characterization: Stamp Transfer of Bacteria
  • 06:27Mutagenesis and Functional Selection Protocols: Representative Results
  • 08:14Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Aqui demonstramos um protocolo simples para criar uma biblioteca aleatória mutante para uma seqüência alvo. Nós mostramos como esse método, que é realizado in vivo em Escherichia coli, pode ser acoplado com seleções funcional para evoluir novas atividades enzimáticas.

Tags

MutagenesisFunctional SelectionDirected EvolutionProteinsE. ColiMutant LibrariesColE1 PlasmidDNA Polymerase IMutator StrainSolid MediaMutation FrequencyLabelingPCRCloningSequence Space ExplorationBiochemical Activities

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