February 13th, 2011
Dimostriamo nel video un metodo per produrre una occlusione dell'arteria cerebrale media in topi adulti utilizzando un monofilamento intraluminale. Mostriamo anche come valutare il grado di infarto cerebrale da 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) colorazione.
Ciao, mi chiamo Terrence Jam. Mi chiamo Hai Joe. Oggi ti mostreremo come eseguire un modello murino di occlusione dell'arteria al media.
Quindi iniziamo. Questo esperimento inizia con la preparazione della sutura. Inizia tagliando la sutura in pezzi da 20 millimetri.
Quindi arrotondare la punta portando la sutura verso un cauterizzatore. Successivamente, misurare la punta della sutura. Ora siamo pronti per iniziare l'intervento con la maschera posizionata sulla schiena.
Fai un'incisione lungo la linea mediana. Utilizzare una pinza per esporre l'ECA. L'arteria carotide esterna lungo l'ECA è composta da molti rami.
Una di queste branche è la STA, l'arteria tiroidea superiore. L'STA deve essere coagulato con una pinza bipolare. Quindi la STA deve essere tagliata per consentire all'ECA di essere meglio isolata.
Successivamente, l'ECA viene coagulato e di dimensioni il più lontano possibile dal CCA. A questo punto, è possibile isolare l'ECA per un migliore accesso. Quindi legare liberamente due suture attorno all'ECAA pochi millimetri di distanza.
Applicare il morsetto alla diramazione del CCA a ECA e ICA. Quindi procedere a tagliare la punta del moncone ECA. Quindi, riposizionare l'ECA in modo che si allinei all'ICA.
Ciò consente alla sutura di avere un ingresso continuo dall'ECA all'ICA. Misurare la lunghezza totale della sutura prima dell'inserimento. Inserire la sutura nell'apertura praticata agganciando il moncone ECA.
Quando la sutura supera il nodo distale, fissare il nodo stringendolo. Quindi, rimuovere la pinza e inserire ulteriormente la sutura nell'ECA. Quando la sutura supera il nodo prossimale, fissare il nodo stringendolo.
Dopo aver fissato entrambi i nodi, inserire con cura la sutura lungo l'arteria fino a quando non vengono passati da nove a 10 millimetri di sutura. Il punto di biforcazione, questo può essere fatto sottraendo la lunghezza della sutura fino al punto di biforcazione dalla lunghezza totale della sutura. Quando la sutura raggiunge l'origine dell'MCA.
L'MCA è occluso. Dopo 24 ore, le masse si sacrificano e il cervello isolato. Per la colorazione TTC, il cervello isolato viene posto in uno stampo e affettato con una lama di rasoio.
Quindi il cervello viene posto in TTC al 2% per 20 minuti a temperatura ambiente. Infine, il cervello è fisso, durante la notte e neutro. Formina tamponata.
La preparazione della sutura è un processo delicato. Ecco alcuni consigli utili. Posizionare la sutura e il cauterizzatore in questo modo.
Quindi, mantenendo fermo il cauterizzatore, avvicinare lentamente la sutura. Quindi, misura la sutura per assicurarti che sia della giusta dimensione. La dimensione della sutura che usiamo in questo esperimento è di circa 0,21-0,22 millimetri.
Per iniziare l'intervento, posizionare la maschera sul retro e indurre l'anestesia con il 30% di ossigeno e il 70% di azoto. Praticare un'incisione lungo la linea mediana e quindi applicare i divaricatori per aprire l'accesso all'area. Dovrebbe assomigliare a questo.
Separare accuratamente il tessuto con la pinza. Quindi esporre e isolare l'ECA con la pinza nel processo di isolamento dell'ECA, l'STA deve essere coagulato e tagliato. In questo modo è possibile isolare un pezzo di ECA più lungo.
Successivamente, l'ECA deve essere coagulato con l'aiuto di una pinza bipolare Dopo la coagulazione, l'ECA deve essere tagliata. Quindi, isolare l'ECA e legare due suture attorno all'ECAA a pochi millimetri di distanza. Il risultato dovrebbe essere simile a questo.
Ora applica il morsetto alla biforcazione di CCA a ICA ed ECA. Assicurati che il vongolo ostruisca completamente il flusso sanguigno all'ECA. Quindi agganciare l'estremità del moncone ECA.
Misurare la sutura Prima dell'inserimento dopo che è stata praticata un'apertura sull'ECA. Inserire la sutura e l'apertura oltre il nodo distale. Dopo che la sutura è passata il nodo distale, stringere il nodo.
Quindi, rimuovere il morsetto. Dopo aver verificato che il nodo distale sia sicuro, inserire la sutura più avanti lungo l'ECA oltre il nodo prossimale. Quindi, stringere il nodo prossimale.
Ora inserisci con cura la sutura lungo l'ECA nell'ICA. Continuare a inserire la sutura lungo l'ICA fino a quando la sutura non supera il punto di biforcazione. Questo può essere fatto sottraendo la lunghezza della sutura fino al punto di biforcazione dalla lunghezza totale della sutura.
Quindi, taglia la sutura in modo che non danneggi il tessuto circostante. Quindi sutura l'incisione e lascia che il topo si riprenda. Prepararsi per la colorazione TTC 24 ore dopo l'intervento.
Inizia sacrificando il topo con lussazione cervicale. Quindi isolare il cervello dal cranio e metterlo in uno stampo. Quindi affettare con la lama di rasoio, colorare il cervello al 2% TTC per 20 minuti a temperatura ambiente.
Quindi fissare durante la notte e tamponato neutro al 10% per melin. Quindi questo è tutto. Grazie per aver guardato e buona fortuna con i tuoi esperimenti.
Questo video dimostra un metodo per produrre un'occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) in topi adulti utilizzando un monofilamento intraluminale. Illustra anche come valutare l'entità dell'infarto cerebrale attraverso la colorazione con cloruro di 2,3,5-trifeniltetrazolio (TTC).