מדריך פשוט בורג שיטה ללימודי xenograft תוך גולגולתי של עכברים

מטרת הליך זה היא ליצור שתל תוך גולגולתי של סרטן המוח כדי להעריך את יעילותו של חומר טיפולי חדשני. זה מושג על ידי הברגה תחילה, בורג מנחה למקומו על הגולגולת, ולאחר מכן החדרת תאים למוח דרך בורג המנחה. השלב הבא הוא להתחיל באתגר טיפולי המכוון לתאי הגידול שהתבססו במוח.

לאחר מכן החיות מנוטרות לתגובות טיפוליות על ידי הערכת תוצאות ההישרדות. בסופו של דבר, חומרים טיפוליים יכולים להשפיע על צמיחת הגידול והישרדותו בקבוצות הטיפול בהשוואה לביקורת. הליך זה יכול להתבצע מספר ימים לפני הזרקת התא.

התחל בשקילת העכברים והרדמתם בתערובת של קטמין וקסילזין באמצעות הזרקה תוך צפקית. ברגע שהעכברים לא מצליחים להגיב לצביטה בבוהן, הכינו את הקרקפת שלהם עם יוד, ואז בצעו חתך של שניים עד שלושה מילימטרים לאורך הצד הימני של קו האמצע וקדמי לקו הבין-אורלי. חתך זה חושף את התפרים העטרתיים והסגיטליים של הגולגולת.

הבגמה ממוקמת בצומת של שני התפרים הללו. סמן את כניסת בורג ההנחיה 0.2 0.5 מילימטר לרוחב ה-bgma ומילימטר אחד לפני ה-bgma. נקודה זו ממוקמת ישירות מעל גרעין CAU 8.

עכשיו בסימן, השתמש במקדחת טוויסט כף יד ועשה חור בעומק מילימטר אחד לתוך בורג הדורה. בורג מנחה מעוקר לתוך החור עד שהוא צמוד למשטח הגולגולת. הקפד להפסיק לקדם את הבורג ברגע שהוא נוגע במשטח הגולגולת.

אם הבורג מכניס את הגולגולת, הגולגולת עלולה להישבר. בורג ההנחיה תומך במחט באורך 1.6 מילימטר בגודל 26. כדי לסגור את פתח הבורג המנחה, הכנס אותו או הברג דמה לתוך המדריך.

עכשיו. סגרו את הפצע על ידי החזקת העור החתוך יחד עם מלקחיים והדבקת העור יחד עם טיפת קשר וטרינר ומרחו לאורך, חתכו את קצה העור, החזיקו את העור למשך מספר שניות עד שהוא נדבק. לבסוף, ספק משככי כאבים הפוכים וקרפרופן על ידי הזרקה תוך-צפקית ואפשר לעכברים להתאושש על מחצלת התחממות.

ההחלמה יכולה להימשך עד 20 דקות. בניסוי לדוגמה, תאי גליומה U 87 מ"ג תורבבו בצלוחיות תרבית רקמות גדולות עם D-M-E-M-F 12 בתוספת סרום בקר עוברי 5%. סעיף זה מתאר כיצד להכין תאים אלה להזרקה ביום ההזרקה.

קצרו את התאים על ידי שטיפת הבקבוק פעמיים עם PBS חם. לאחר מכן הוסיפו 10 מיליליטר PBS המכילים 0.25% טריפסין ו-0.05% EDTA ודגרו על התאים בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס למשך חמש דקות או עד שהם נעקרו. ואז אוספים את התאים ב -10 מיליליטר מדיה.

הניחו את התאים על ציטומטר המו, וספרו את התאים תחת מיקרוסקופ בעקבות התא. ספרו את הצינור החרוטי של 50 מיליליטר המכיל 10 מיליליטר של תרבית, מדיה ותאים צנטריפוגה ב-300 פעמים G למשך ארבע דקות. לאחר הסיבוב, השעו מחדש את התאים במצע תרבית בריכוז של 10 מיליון תאים למיליליטר בריכוז זה, כל חמישה מיקרוליטרים של תרחיף תאים יכיל 50,000 תאים, המשמשים לכל הזרקה תוך גולגולתית.

אחסון, תרחיף התאים להזרקה על קרח. כאן נדרש נפח יחיד של תאים בתרחיף מכיוון שחמישה נפחי מיקרוליטר מתאדים בקלות וכך יהרסו את התאים. התחל בהכנת מזרק המילטון עם אזיקים.

חבר טבעת פלסטיק קטנה לקצה המחט כך שרק שני מילימטרים מהמחט יכולים להימשך מתחת לשקע בורג המדריך. זה מבטיח שנקודת החיסון תהיה בעומק של 3.5 מילימטרים, להרדים עכבר שהוגדל בעבר ולבצע חתך קטן מעל המדריך. הברג והסר את הסטילט.

לאחר מכן מלאו את המזרק בחמישה מיקרוליטרים של התאים המעורבים היטב המאוחסנים על קרח. היזהר להימנע מבועות אוויר במזרק מכיוון שהן עלולות לגרום לתסחיף או שטיפה חוזרת של תאים מחוץ לאתר ההזרקה. אבטח את המזרק למשאבת הזלוף ולאחר מכן הכנס את המחט למדריך.

הברג התחל את עירוי התאים בקצב של 30 מיקרוליטר לשעה. באמצעות המנגנון האוטומטי ניתן להזריק עד 10 בעלי חיים בכל פעם בקצב זרימה קבוע. הזרקה ידנית אפשרית גם אם היא מבוצעת בקצב קבוע וקבוע.

בסיום העירוי, הסר בזהירות את המזרק, ולאחר מכן החלף את הסטילט בבורג המנחה כמו קודם. סגור את הפצע עם קשר וטרינר, ספק משככי כאבים ואפשר לעכברים להתאושש. ההחלמה יכולה להימשך עד 20 דקות.

ארבעה ימים לאחר חיסון תאי U 87 מ"ג, העכברים נשקלו וחולקו באופן אקראי לקבוצות ביקורת וטיפול. לקבוצת הביקורת הוזרקו 100 מיקרוליטר PBS תוך-צפקי ולקבוצת הטיפול הוזרקו 100 מיקרוגרם לכל 100 מיקרוליטר של MG 1 0 2 ip. הזריקה חזרה על עצמה כל יומיים במשך 14 יום בסך הכל שש זריקות.

לאחר ההזרקה האחרונה, העכברים היו במעקב יומיומי ונשקלו כל יומיים. נקודת הקצה של החיה הוגדרה כהתחלה של הפרעות נוירולוגיות משמעותיות כמו שיווי משקל, הפרעה או שיתוק, התייבשות, ירידה במשקל של יותר מ-10% או מוות. ימי הסיום נרשמו כעקומות הישרדות קפלן-מאייר.

מקרי מוות, או שיחות סומנו כנקודות קצה, אירועים, וקיבלו ציון כאחד. בעלי חיים שנותרו בחיים בסוף הניסוי תועדו כלא אירועים וקיבלו ציון של אפס שליטה. בעלי חיים החלו להראות סימנים של הפרעה נוירולוגית וירידה במשקל 23 יום לאחר החיסון הראשוני של התאים.

זה התעכב משמעותית בקבוצה שטופלה ב-A MG 1 0 2. עד היום ה-35, 7 מתוך 9 חיות ביקורת הורדמו. עד היום 78 מתוך תשע חיות ביקורת הומתו בהשוואה לשלושה בלבד מתוך 8:00 בבוקר g 1 0 2 בעלי חיים שטופלו.

ניתוח היסטולוגי של המוחות אישר כי כל תשעת בעלי החיים בקבוצת הביקורת פיתחו גידולים בהשוואה לשלושה בלבד מהעכברים שטופלו ב-8:00 בבוקר.