Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:05Titre
- 01:07Cell Harvest and Lysis
- 01:55Ni-affinity Purification of Hsp104
- 03:16FPLC Purification of Hsp104
- 05:14Representative Results for Hsp104 Purification and Assessment of Disaggregation Activity
- 07:04Conclusion
Qui, descriviamo un protocollo per la purificazione del altamente attivi Hsp104, un esamerica AAA + proteine da lievito, che le coppie idrolisi dell'ATP per disaggregazione delle proteine. Questo schema sfrutta un costrutto His6-tag per la purificazione di affinità<em> E. coli</em> Seguita da cromatografia a scambio anionico, His6-tag rimozione di proteasi TEV, e le dimensioni di esclusione cromatografia.
Tags
PurificationHsp104Protein DisaggregaseHexameric AAA+ ProteinATP HydrolysisProtein DisaggregationRenaturationDisordered AggregatesHeat ShockCross-beta Amyloid FibrilsPrionsPhenotypic VariationPreamyloid OligomersE. Coli Orthologue ClpBHsp104 OrthologuesAnimal CellsTherapeutic AgentNeurodegenerative DiseasesMisfolding Of ProteinsToxic Preamyloid OligomersAmyloid Fibrils
