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Monitoraggio del sistema ubiquitina-proteasoma attività nelle cellule viventi Utilizzando una degron (dgn)-destabilizzato proteina verde fluorescente (GFP) a base di proteine ​​Reporter
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Monitoring of Ubiquitin-proteasome Activity in Living Cells Using a Degron (dgn)-destabilized Green Fluorescent Protein (GFP)-based Reporter Protein
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Monitoraggio del sistema ubiquitina-proteasoma attività nelle cellule viventi Utilizzando una degron (dgn)-destabilizzato proteina verde fluorescente (GFP) a base di proteine ​​Reporter

DOI:
10.3791/3327-v

•

10:25 min

•

November 10, 2012

•

, , , ,
1Molecular and Cell Biology,Institute for Biomedical Aging Research, 2Department of Gerontology and Geriatrics, Netherlands Consortium for Healthy Aging,Leiden University Medical Center

Chapitres

  • 00:00Titre
  • 01:21Virus Production
  • 04:11Titering of Virus
  • 06:13Transduction of Human Diploid Fibroblasts
  • 07:19FACS Experiments
  • 08:50Proteasomal Activity in vivo
  • 10:04Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Un metodo per monitorare l'attività ubiquitina-proteasoma in cellule viventi è descritto. Un degron-destabilizzato GFP-(GFP-dgn) e di una stalla GFP-dgnFS proteina di fusione vengono generati e trasdotto nella cella utilizzando un vettore lentivirale espressione. Questa tecnica permette di generare una linea cellulare stabile GFP-dgn/GFP-dgnFS esprimendo in cui ubiquitina-proteasoma attività può essere facilmente valutata usando epifluorescenza o citometria a flusso.

Tags

Ubiquitin-proteasome ActivityDegronGreen Fluorescent Protein (GFP)Reporter ProteinProteolysisIntracellular OrganelleAbnormal ProteinsMisfolded ProteinsDamaged ProteinsOxidized ProteinsProteasome MaintenanceCellular ProcessesStress ResponseCell Cycle RegulationCellular DifferentiationImmune System ResponseUbiquitin-proteasome System DysfunctionTumorsNeurodegenerative DiseasesCellular SenescenceOrganismal AgingPrimary CellsLentiviral Expression VectorsTransfection Efficiency

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