Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu. Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Chapitres
- 00:05Titre
- 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
- 03:54Culturing and Sonication
- 05:26Affinity Purification
- 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
- 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
- 11:02Résultats
- 14:27Conclusion
Affinitetsoprensning af mærkede proteiner i kombination med massespektrometri (APMS) er en kraftig fremgangsmåde til systematisk kortlægning af protein-interaktion net og til undersøgelse af den mekanistiske basis af biologiske processer. Her beskriver vi en optimeret sekventiel peptid affinitet (SPA) APMS fremgangsmåde udviklet til bakterien<em> Escherichia coli</em>, Der kan anvendes til at isolere og karakterisere stabile multi-proteinkomplekser til næsten homogenitet, selv ud fra et lavt kopital pr celle.
Tags
Protein ComplexesEscherichia ColiSequential Peptide Affinity PurificationTandem Mass SpectrometryProtein-protein InteractionsSubunit CompositionGene FunctionBiological SystemsAffinity PurificationMass SpectrometryChromosomally-tagged ProteinsCarboxy-terminal Sequential Peptide Affinity (SPA) Dual Tagging SystemGram-negative Escherichia ColiGenetically-tractable Host Laboratory StrainsGenome-wide InvestigationsProkaryotesTandem Affinity Purification MethodCalmodulin Binding Peptide (CBP)Tobacco Etch Virus
