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Identification of Protein Complexes in Escherichia coli using Sequential Peptide Affinity Purification in Combination with Tandem Mass Spectrometry
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のタンパク質複合体の同定<em>大腸菌</em>タンデム質量分析との組み合わせでシーケンシャルペプチドアフィニティ精製を用いた

DOI:
10.3791/4057-v

•

14:58 min

•

November 12, 2012

•

, , , ,
1Banting and Best Department of Medical Research, Donnelly Centre,University of Toronto, 2Deparment of Biochemistry, Research and Innovation Centre,University of Regina, 3Department of Medical Genetics and Microbiology,University of Toronto

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 01:47Construction of Gene-specific SPA-tagging in E. Coli DY330 Strain
  • 03:54Culturing and Sonication
  • 05:26Affinity Purification
  • 07:53Proteolysis and Sample Preparation for Mass Spectrometry
  • 09:38Protein Identification by LTQ Orbitap Velos Mass Spectrometer
  • 11:02Résultats
  • 14:27Conclusion

Summary

Traduction automatique

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マススペクトロメトリー（APMS）との組み合わせでタグ付けされたタンパク質のアフィニティー精製は、タンパク質相互作用ネットワークの体系的マッピングのため、生物学的プロセスの基本メカニズムを調査するための強力な方法です。ここでは、細菌のために開発最適化された順次ペプチドアフィニティー（SPA）をAPMSの手順を説明<em>大腸菌</emでも、セルあたりの低コピー数から始まるほぼ均一に安定した多タンパク質複合体を分離し、特徴付けるために使用することができます>。

Tags

Protein ComplexesEscherichia ColiSequential Peptide Affinity PurificationTandem Mass SpectrometryProtein-protein InteractionsSubunit CompositionGene FunctionBiological SystemsAffinity PurificationMass SpectrometryChromosomally-tagged ProteinsCarboxy-terminal Sequential Peptide Affinity (SPA) Dual Tagging SystemGram-negative Escherichia ColiGenetically-tractable Host Laboratory StrainsGenome-wide InvestigationsProkaryotesTandem Affinity Purification MethodCalmodulin Binding Peptide (CBP)Tobacco Etch Virus

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