一个简单的协议提取血细胞从野生毛毛虫

该程序的总体目标是从野生毛毛虫中提取、可视化和计数 he 细胞。这是通过首先将毛毛虫放在冰上麻醉毛毛虫，注射含有抗凝剂的缓冲溶液，然后将毛毛虫放回冰中，让毛毛虫细胞在提取前重新进入循环来实现的。第二步是使用干净的手术刀在毛毛虫的后端做一个浅切口。

接下来，使用软镊子轻轻挤压毛毛虫。然后，使用微量移液管吸出缓冲溶液血液淋巴混合物，并收集在微量离心管中。最后一步是将血液淋巴液与等体积的缓冲溶液轻轻混合，并将 10 微升溶液转移到血液细胞仪上，以观察和计数 he 细胞的数量。

最终，这种血细胞提取方法可以用作一种快速有效的方法来计数来自各种毛虫物种的 he 细胞，并作为检查昆虫细胞免疫反应的生理方面的工具。这种技术的主要优点是它可以用来从毛毛虫中提取血源，而且距离非常减少。其他毛毛虫模型是通过切割其中一个优点来放血的，从流出的液体中提取他的细胞。

此外，该技术可用于从其他昆虫物种中提取血型。这种方法可用于回答生态免疫学领域的关键问题，例如昆虫细胞免疫反应如何随饮食质量、发育阶段或暴露于不同病原体而变化。要开始此程序，请在血细胞提取前将倒数第二龄幼虫在冰上冷却 20 分钟，以麻醉它们。

之后，将干净的 16 号毛细管针头的钝端插入连接到 20 毫升玻璃注射器的管道中。在实验室工作台上打开装有收集溶液的试管。用大约 10 至 15 μL 缓冲液缓慢填充毛细管。

然后将针头放在放置在解剖显微镜旁边的粘土球上。将毛毛虫放入培养皿中。昆虫应侧放，以便球形清晰可见。

在解剖显微镜下观察时，用一对镊子将毛毛虫固定到位，并将针头放在靠近昆虫角质层通常较软的球形之一的地方。然后轻轻地将毛细管针压在昆虫的身体上。一旦针头穿透角质层，将总体积的溶液注入毛毛虫。

注射后毛毛虫的身体会肿胀，但不应爆裂或渗出。将毛毛虫放回冰培养皿中。将昆虫放在背侧，以防止缓冲液从伤口中泄漏。

对用于血液跛行提取的每只毛毛虫重复注射。然后让所有昆虫在冰上冷却 30 分钟。现在，将毛毛虫放在解剖显微镜下的培养皿中。

使用无菌手术刀小心地在毛毛虫的后部区域做一个约 2 到 3 毫米长的浅切口，不要损坏肠道或其他内脏器官。接下来，使用一对柔性塑料镊子轻轻挤压毛毛虫，同时用 10 微升移液器吸头收集大约 10 至 20 微升的血液软绵绵混合物。同样，要小心不要伤害内部组织。

之后，丢弃毛毛虫残骸。将每只毛毛虫的血液跛行收集在单独标记的硅化 0.5 毫升微量离心管中。然后将大约 10 至 20 微升的孵育溶液添加到从单个毛毛虫收集的每个血液跛行样本中。

在此步骤中，始终将血淋巴样品放在冰上。计数前立即混合血淋巴样品和孵育溶液。他细胞。

这种处理允许 he 细胞适当分离并防止结块。使用干净的移液器吸头将 10 μL 与孵育溶液混合的血液淋巴样品转移到血细胞仪上。然后使用复合显微镜计数并记录血细胞仪中央网格的至少 15 个大方块中的 he 细胞数量。

将这些值相加得到 15 个正方形中血细胞数的总和。接下来，使用装有蒸馏水和去离子水的洗涤瓶彻底冲洗血细胞计数器及其盖玻片。然后用 Kim 湿巾擦干。

对其余的血液跛行样本重复这些程序，并计算每毛虫每毫升血液跛行体积的平均 he 细胞数。明场显微镜图像以 20 倍放大倍率显示从 nucle hin ai 毛虫中提取的 he 细胞。在此程序之后，收集的血细胞可用于研究细胞免疫反应并设置检测，例如吞噬作用和帽、选择封装和 pH 氧化酶活性。

此外，可以收集未使用的 R-N-A-D-N-A 和蛋白质用于进一步测定，以研究昆虫中的这些细胞免疫反应。看完这个视频，你应该对如何注射毛毛虫以提取血淋巴液以及如何收集含有活血细胞的血淋巴液有一个很好的了解。