This content is Free Access.
Chapitres
- 00:05Titre
- 01:37CRISPR/Cas System Overview
- 02:29Generation of Long Pre-crRNA Substrates via PCR
- 04:14Generation of Intermediate Pre-cdRNA Substrates via Annealing of DNA Oligonucleotides
- 06:10Generation of Short Cas RNA Substrates via Custom RNA Oligonucleotide Synthesis
- 06:41In vitro T7 RNA Polymerase Transcription
- 08:04Cas6 Endonuclease Assay
- 09:08Results: Representative Cas6 Endonuclease Assay
- 11:10Conclusion
CRISPR / CAS-system förmedlar adaptiv immunitet i bakterier och arkéer. Många Cas proteiner föreslås att fungera som endoribonucleases verkar på crRNA prekursorer av varierande längd. Här illustrerar vi tre olika metoder för att generera före crRNA substrat för biokemisk analys av Cas endonukleasaktivitet.
Tags
Substrate GenerationEndonucleasesCRISPR/Cas SystemsVirusesProkaryotic HostsBacterial EvolutionArchaeal LifeRestriction ModificationAbortive InfectionAdaptive Immune SystemsCRISPR SequencesCas GenesCas ProteinsSpacer ElementCRISPR ClusterPrecursor-crRNACas6 FamilyCrRNAsViral DNA UptakeCascade ComplexBase ComplementarityNuclease Cas3Invader DNA Destruction
