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Metabolic Labeling and Membrane Fractionation for Comparative Proteomic Analysis of Arabidopsis thaliana Suspension Cell Cultures

Metabólica Labeling e Membrana Fracionamento para Comparative Analysis proteômica de<em> Arabidopsis thaliana</em> Culturas suspensão de células

DOI:
10.3791/50535-v

•

11:44 min

•

September 28, 2013

•

, ,
1Signaling Proteomics,Max Plank Institute of Molecular Plant Physiology, 2Department of Plant Systems Biology,University of Hohenheim

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 01:35Plasma Membrane Purification
  • 03:56Detergent Resistant Membrane Preparation
  • 05:33Extraction of Proteins from the Detergent Resistant Fraction and In-solution Trypsin Digestion
  • 07:04Use of C18-StageTips for Peptide Desalting and Concentration
  • 08:48Results: Comparative Proteomic Analysis
  • 11:00Conclusion

Summary

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Aqui, descrevemos um método robusto para o fraccionamento das membranas plasmáticas de plantas solúveis em membranas resistentes a detergente e do detergente baseado numa mistura de não marcado e in vivo totalmente 15 n marcadas culturas de células de Arabidopsis thaliana. O procedimento é aplicado para estudos de proteômica comparativas para compreender os processos de sinalização.

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Keywords: Metabolic LabelingMembrane FractionationComparative ProteomicsArabidopsis ThalianaSuspension Cell CulturesPlasma MembraneMicrodomainsDetergent-resistant Membrane FractionSucrose GradientQuantitative ProteomicsK15NO3 Labeling

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