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À grande échelle Gene Knockdown dans<em> C. elegans</em> Utilisation ARNdb alimentation bibliothèques pour générer des phénotypes robustes perte de fonction
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Journal JoVE Biologie
Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes
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À grande échelle Gene Knockdown dans<em> C. elegans</em> Utilisation ARNdb alimentation bibliothèques pour générer des phénotypes robustes perte de fonction

DOI:
10.3791/50693-v

•

18:38 min

•

September 25, 2013

•

, ,
1Molecular and Cellular Biology Program,University of Massachusetts, Amherst, 2Neuroscience and Behavior Program,University of Massachusetts, Amherst, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of Massachusetts, Amherst

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 02:54How to Determine Plasmid Loss
  • 04:32Making Temporary Copies of the Library Omniplates
  • 06:35Preparation of Bacteria for Feeding Worms
  • 09:28Determining the Concentration of L1 Arrested C. elegans Larvae
  • 10:53dsRNA Feeding Screen
  • 12:37Results: Effects of egl-30, dpy-17, pat-10, and unc-4 Knockdown
  • 17:50Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Bien que l'ARN double brin d'alimentation en C. elegans est un outil puissant pour évaluer la fonction des gènes, les protocoles actuels pour les écrans d'alimentation à grande échelle entraînent des économies de knockdown variables. Nous décrivons un protocole amélioré pour réaliser des écrans d'alimentation d'ARNi à grande échelle qui se traduit par effet de choc très efficace et reproductible de l'expression génique.

Tags

RNA InterferenceRNAiDsRNA FeedingC. ElegansGene KnockdownLoss-of-function PhenotypesHigh-throughput ScreeningPlasmid LossProtocolNeurons

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