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Large-scale Gene Knockdown in C. elegans Using dsRNA Feeding Libraries to Generate Robust Loss-of-function Phenotypes

Em larga escala Knockdown Gene em<em> C. elegans</em> Usando bibliotecas de alimentação dsRNA para gerar fenótipos robustos perda de função

DOI:
10.3791/50693-v

•

18:38 min

•

September 25, 2013

•

, ,
1Molecular and Cellular Biology Program,University of Massachusetts, Amherst, 2Neuroscience and Behavior Program,University of Massachusetts, Amherst, 3Department of Biochemistry and Molecular Biology,University of Massachusetts, Amherst

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 02:54How to Determine Plasmid Loss
  • 04:32Making Temporary Copies of the Library Omniplates
  • 06:35Preparation of Bacteria for Feeding Worms
  • 09:28Determining the Concentration of L1 Arrested C. elegans Larvae
  • 10:53dsRNA Feeding Screen
  • 12:37Results: Effects of egl-30, dpy-17, pat-10, and unc-4 Knockdown
  • 17:50Conclusion

Summary

Traduction automatique

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Enquanto dsRNA alimentação em C. elegans é uma ferramenta poderosa para avaliar a função do gene, os protocolos atuais para telas de alimentação em grande escala resultar em eficiências knockdown variáveis. Descreve-se um protocolo melhorado para a realização em grande escala de RNAi telas de alimentação, que resulta em knockdown altamente eficaz e reprodutível de expressão do gene.

Tags

RNA InterferenceRNAiDsRNA FeedingC. ElegansGene KnockdownLoss-of-function PhenotypesHigh-throughput ScreeningPlasmid LossProtocolNeurons

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