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Journal JoVE Bio-ingénierie
Isolation and Characterization Of Chimeric Human Fc-expressing Proteins Using Protein A Membrane Adsorbers And A Streamlined Workflow
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Isolamento e caratterizzazione delle proteine chimeriche che esprimono fc umano utilizzando proteine A adsorbenti di membrana e un flusso di lavoro semplificato

DOI:
10.3791/51023-v

•

10:33 min

•

January 08, 2014

•

, , , , , , , ,
1Department of Chemical and Biomolecular Engineering,Ohio University, 2Biomedical Engineering Program,Russ College of Engineering and Technology, Ohio University, 3Department of Dermatology,Brigham and Women’s Hospital, Harvard Medical School

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 01:39Preparation and Loading of Protein A Membrane Adsorber
  • 03:36Eluting, Concentrating, and Dialyzing the Protein
  • 04:49Quantify and Characterize Purified Product in an Expedited Western Blotting Procedure
  • 07:00Results: Characterization of Chimeric Murine Galectin-1 Fused to Human Fc (Gal-1hFc)
  • 10:11Conclusion

Summary

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Rispetto alla cromatografia di affinità tradizionale che utilizza colonne piene di perline di agarosio A, gli adsorbenti a membrana A proteici possono accelerare significativamente l'isolamento su scala di laboratorio degli anticorpi e di altre proteine che esprimono frammenti Fc. Metodi di analisi e quantificazione appropriati possono accelerare ulteriormente l'elaborazione delle proteine, consentendo di completare l'isolamento / caratterizzazione in un giorno lavorativo, anziché oltre 20 ore lavorative.

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Affinity ChromatographyProtein AMembrane AdsorberFc-expressing ProteinsChimeric ProteinsStreamlined WorkflowProtein PurificationCell Culture SupernatantWestern BlottingFlow Cytometry

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