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Uso de Nucleotídeos stopped-flow de fluorescência e rotulados para analisar o ciclo de rotatividade ATP de cinesinas
Journal JoVE
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Journal JoVE Chimie
Use of Stopped-Flow Fluorescence and Labeled Nucleotides to Analyze the ATP Turnover Cycle of Kinesins

Uso de Nucleotídeos stopped-flow de fluorescência e rotulados para analisar o ciclo de rotatividade ATP de cinesinas

DOI:
10.3791/52142-v

•

07:25 min

•

October 17, 2014

•

, , ,
1School of Life Sciences,University of Nottingham

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 01:13Measurement of Association and Dissociation Rate Constants for mantATP
  • 04:18Measurement of the Dissociation Rate Constant for mantADP
  • 05:19Results: Analysis of the ATP Turnover Cycle of Kinesins
  • 06:45Conclusion

Summary

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As cinesinas são caracterizados pela interacção dependente de nucleótido com microtúbulos: um ciclo de facturação ATP acoplado a um ciclo de interacção dos microtúbulos. Aqui, nós descrevemos protocolos para analisar a cinética da transição de nucleótidos individuais do ciclo de facturação de uma quinesina ATP utilizando nucleótidos marcados com fluorescência e fluorescência de fluxo parado.

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Keywords: KinesinATP TurnoverMicrotubuleStopped-flow FluorescenceFluorescently Labeled NucleotidesNucleotide Transition KineticsRapid MixingReaction Kinetics

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