마이크로 컴퓨터 단층 촬영과 누드 마우스에 인간의 지방 주입의 생존 능력의 평가

이 절차의 전반적인 목표는 마이크로 CT를 사용하여 지방 이식 준비와 전달의 지연 기술 간의 부피 유지를 비교하는 마우스 모델을 설명하는 것입니다. 이것은 이식할 준비가 된 지방을 얻기 위해 먼저 인간 lipo aspirate를 처리함으로써 달성됩니다. 두 번째 단계는 CD 1 개의 흉선 누드 마우스의 두피에 지방 이식편을 삽입하는 것입니다.

다음으로, CT 스캔 마우스, 이미지 재구성 및 볼륨 유지를 정량화하여 매주 지방 이식 생존을 분석합니다. 마지막 단계는 8주가 끝날 때 지방 이식을 설명하고 체중 및 조직학별로 비교하는 것입니다. 궁극적으로 마이크로 CT와 조직학은 지방 이식의 질과 생존율의 차이를 보여주기 위해 사용됩니다.

지방 이식편의 계량과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 연구 동물을 희생하지 않고도 초기 이식 후 여러 시점에서 지방 이식 부피를 시각화하고 객관적으로 정량화할 수 있다는 것입니다. 이 방법에 대한 아이디어는 마이크로 CT를 사용하여 calva Defects를 분석하기 시작했을 때 처음 떠올랐습니다. 이 기술의 의미는 지방 이식, 유지 및 생존력을 평가하는 모든 연구에 대한 수술 모델을 제공한다는 것입니다.

일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 두피 위의 올바른 위치에 지방 이식편을 포함하는 것이 어렵기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 이 기술의 시각적 시연은 기술의 작은 편차가 결과를 바꿀 수 있는 수많은 단계가 있기 때문에 이식 및 재구성 단계를 배우기 어렵기 때문에 매우 중요합니다. Coleman 절차를 사용하여 선택적 지방 흡입술을 받는 건강한 여성 환자의 복부, 옆구리 및 허벅지 부위에서 인간 지방 조직을 채취합니다.

이식을 위해 lipo 흡인을 처리하려면 먼저 지방이 30분 동안 가라앉도록 합니다. 리포 흡인은 일반적으로 위쪽에 기름, 중간에 지방, 아래쪽에 혈액이 있는 세 개의 층으로 침전됩니다. 흡입하고 상단 오일층을 버린 다음 하단 혈액층을 버립니다.

남아 있는 tumescent 유체 또는 세포 파편을 추가로 제거하려면 350Gs 및 섭씨 4도에서 5분 동안 지방을 원심분리합니다. 원심분리 후 하단 혈액층과 상단 오일층을 흡인합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 이식에 필요한 지방의 양을 계산하기 위해, 지방 이식을 수행하기 위해, 암컷 동형접합 CD 누드 마우스 1마리를 얻는다.

실험 연구의 경우 생후 8주에서 12주 사이의 쥐를 선택하여 마취를 유도합니다. 마우스의 호흡 속도가 느려지면 약 10분 동안 분당 2리터의 불소 산소 혼합물 2.5%is가 있는 녹다운 박스에 마우스를 넣습니다. 발가락 꼬집기로 적절한 진정제를 확인하십시오.

마우스의 양쪽 눈에 수의학 윤활 안과 연고를 바르고 마우스의 코를 콧방울에 넣어 분당 1-2리터의 속도로 2.5%ISO 불소 산소 혼합물을 전달합니다. 다음으로, 마우스 아래에 멸균 필드를 설정합니다. 그런 다음 2.5% 포비돈 요오드로 두피를 살균한 다음 70% 에탄올 용액을 투여합니다.

살균을 두 번 더 반복합니다. 실온과 평형을 이룬 1ml의 지방이 든 1ml의 루어 잠금 주사기를 다시 로드합니다. 14 게이지 8cm 길이의 지방 이식 캐뉼라를 주사기 끝에 연결합니다.

사기에 200-400마이크로리터의 지방이 남을 때까지 주사기 플런저를 눌러 시스템을 프라임합니다. 주사기 플런저를 누르면서 미세한 집게를 사용하여 원위 캐뉼러 구멍에서 나오는 지방을 관찰하여 캐뉼라가 지방으로 완전히 채워졌는지 확인합니다. 두개골의 가장 큰 측면 위에 놓인 정중선의 등쪽 피부를 들어 올립니다.

가는 가위를 사용하여 피부를 1.5mm 정도 자릅니다. 상처 중간에 6개의 나일론 봉합사를 놓으면 나중에 상처 가장자리를 함께 가져오는 데 사용됩니다. 이식 후 봉합사를 묶지 마십시오.

그런 다음 피부 절개를 통해 캐뉼라를 삽입하고 두개골 위에 부채꼴 모양의 패턴으로 캐뉼라를 앞뒤로 통과시켜 두개골 위에 있는 피부에 대한 결합 조직 부착을 해제하여 두개골 위에 있는 피부에 대한 결합 조직 부착을 해제하여 두개골 위에 피하 포켓을 만들고, 끝이 포켓의 테라모스 측면에 놓일 때까지 캐뉼라를 두개골 바로 위의 마우스 정중선에 배치합니다. 눈 사이에 그려진 선 바로 뒤에 있어야 합니다. 역행 방식으로 지방을 천천히 주입하여 캐뉼러를 뒤로 당기면서 플런저를 전진시킵니다. 집게를 사용하여 상처 가장자리를 함께 가져와서 주머니에서 지방이 새어 나오지 않도록 들어 올립니다.

이전에 놓인 봉합사를 묶고 첫 번째 매듭이 피부에 가볍게 닿도록 합니다. 사각형 매듭을 세 개 더 묶고 3mm 꼬리로 봉합사를 자릅니다. 마취에서 마우스를 제거하고 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 복구를 진행합니다.

첫 번째 스캔을 수행하기 전에 공기, 물 및 뼈 강도를 구별하는 이미징 팬텀으로 마이크로 CT를 보정합니다. 보정 후. 4개의 마우스를 복부 위치의 스캐너에 2개의 마우스가 위에, 2개의 마우스가 아래에 위치하도록 놓습니다.

스캐닝 침대에 놓습니다. 이전에는 마우스 본체를 고정하기 위해 60ml 주사기로 제작되었으며 10ml 주사기는 노즈 콘으로 제작되었습니다. 스카우트 이미지를 통해 코에서 첫 번째 경추까지, 그리고 두개골 위에서 두개골 기저부까지 마우스의 전체 두개골이 이미지화될 것임을 확인합니다.

텍스트 프로토콜에 설명된 대로 스캔을 계속합니다. 픽셀 강도에 대한 임계값을 사용하여 복셀을 선택하여 관심 영역 또는 ROI를 생성할 수 있는 마이크로 CT 이미징 분석 소프트웨어로 재구성된 이미지를 엽니다. 먼저 재구성된 CT 이미지를 2차원, 관상, 축 방향 및 시상 뷰로 로드합니다.

축 슬라이스를 가이드로 사용하여 지방 이식편의 가장 왼쪽 측면에 해당하는 시상 슬라이스로 이동합니다. 지방 이식편에 해당하는 모든 복셀을 캡처하지만 주변 조직과 뼈는 제외하는 픽셀 강도에 대한 상한 및 하한 임계값을 선택합니다. 지방 이식편에 해당하는 시상면(sagittal view)에서 ROI를 정의합니다.

이전에 정의된 픽셀 강도 임계값을 사용하여 이식편의 가장 오른쪽 측면에 도달할 때까지 5번째 시상 절편마다 이 절차를 반복합니다. 다음으로, 모든 2D ROI에서 선택한 복셀을 단일 결합된 3D ROI로 보간하고, 소프트웨어가 계산한 ROI 볼륨을 기록합니다. 3D 등가곡면을 렌더링하여 최종 지방 이식 부피를 시각화합니다.

후속 분석에서는 픽셀 강도 최대 및 최소 임계값을 8주차 시점에 대해 마우스를 스캔한 후 기준선 분석에 사용된 값과 동일하게 유지해야 합니다. 텍스트 프로토콜에 설명된 대로 마우스를 안락사시킵니다. 건절개술 가위를 사용하여 마우스를 수술 필드에 놓고 주머니와 지방 이식편의 피부 및 결합 조직 부착물을 조심스럽게 엽니다.

이 시점에서는 이식편의 발치를 돕기 위해 위에 있는 등쪽 피부의 일부를 절제하는 것이 도움이 될 수 있습니다. 절제 후 이식편에서 채취한 결합 조직을 최소화하기 위해 절제 시 가능한 한 이식편에 가깝게 유지하십시오. 최소 0.01g까지 정확한 찢어진 저울로 질량을 측정합니다.

지방 이식은 연구 기간 동안 점진적으로 감소하여 8주차까지 평균 생존율이 62.2%에 이르렀습니다. 8주차 스캔이 완료되면, 각 지방 이식편을 한 조각으로 추출했습니다. WIL 콕신 랭크 합계 테스트는 마이크로 CT로 얻은 지방 이식편의 부피 측정 또는 물리적 질량으로 계산된 부피 측정 간의 차이를 비교하는 데 사용되었습니다.

이 두 방법 사이에는 유의미한 차이가 발견되지 않았습니다. 일단 숙달되면 이 기술은 적절하게 수행되면 세션당 2시간 안에 수행할 수 있습니다. 이 절차를 시도할 때 이 절차를 따를 때마다 동일한 방식으로 수술과 재건을 수행해야 한다는 것을 기억하는 것이 중요합니다.

면역 염색 및 Q-R-T-P-C-R과 같은 다른 방법을 수행하여 혈관성 및 유전자 발현이 다양한 이식 방법에 의해 어떻게 영향을 받는지와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다. 이 비디오를 시청한 후에는 연속 이식을 위한 지흡입 처리 방법, 생체 내 CT 스캔 이식편, 이식편 생존을 평가하고 체중 조직학을 위한 이식편을 계획하는 방법, 개발 후 향후 분석 방법을 잘 이해하게 될 것입니다. 이 기술은 성형 수술 분야의 연구자들이 미러링 모델에서 지방 이식을 탐구할 수 있는 길을 열었습니다.