水域のためのユスリカ（双翅目）簡易生物調査プロトコルとして表面フローティング蛹脱皮殻の使用

この手順の全体的な目標は、水質評価のためのカイロノミニー、表面浮遊瞳孔exサンプルの収集と処理の手法を説明することです。これは、最初に水生環境からカイロン瞳孔exのフィールドサンプルを収集することによって達成されます。2番目のステップでは、各フィールドサンプルから300個のサンプルのサブサンプルが選択され、サンプルは異なる形態学的グループに分割されます。

最終ステップでは、各グループから複数の代表者がガラス顕微鏡スライドに取り付けられます。最終的に、標本は属または種に識別され、水質条件が評価されます。従来の底生生物マクロ無脊椎動物のサンプリングなどの既存の方法に対するこの手法の主な利点は、サンプルの収集と処理が効率的で経済的であり、ほぼすべての水生環境に適用できることです。

この手法を使用すると、生物学的モニタリング研究のための貴重な情報が得られ、擾乱、汚染イベント、または気候変動によってサイトが時間の経過とともにどのように変化するかについての洞察を得ることができます。私たちは、この技術を小川の生息地でどのように使用できるかに焦点を当てていますが、川、湖、池、es、陪審員、岩のプールなどの他の水生システムにも簡単に適用できます。収集するサンプルごとに、日付と地域のラベルを1つずつ内側に、1つのラベルを1つのサンプルジャーの外側に配置します。

次に、片手に幼虫トレイ、もう片方の手にふるいを持つ各サンプルについて、水瞳孔のexusと破片が幼虫トレイまたはふるいを通してサンプルに入ったときに瞳孔滲出液が蓄積する水に幼虫トレイを浸します。収集から10分後、サンプルリーチから収集した水で満たされたボトルを使用して、破片をふるいの1つの領域に集中させます。次に、鉗子とエタノールの流れを使用して、瞳孔exusを適切な事前標識されたサンプルジャーに慎重に移し、ジャーにエタノールを充填します。

サンプルのピッキングを開始するには、瞳孔滲出液サンプルごとに1つのDr Vialに適切な日付と産地ラベルを貼り、バイアルの4分の3をエタノールで満たします。次に、対応するサンプルジャーから蓋を取り外し、蓋に瞳孔exが付着していないか確認します。エタノールの噴出ボトルを使用して、蓋から中身をペトリ皿にそっとすすぎます。

次に、サンプルジャーの内側からラベルをはがします。ラベルの中身もペトリ皿にそっと洗い流し、ラベルを脇に置きます。次に、サンプルジャーの内容物を白い幼虫トレイに移し、ジャーをエタノールですすいで、ジャーに瞳孔の滲出液が残らないようにします。

瞳孔の滲出液残留物とエタノールの雄弁なものを幼虫トレイからペトリ皿に移します。サンプルがエタノールで覆われていることを確認してください。次に、ペトリ皿を実体顕微鏡の下に置き、生物について皿を体系的にスキャンします。

次に、鉗子を使用して、瞳孔の滲出液を皿から適切な対応するバイアルに移します。後で識別の問題を避けるために、壊れたり乾燥したりした瞳孔の滲出液を拾わないようにしてください。目に見える瞳孔の滲出液がすべて移されたら、皿の側面に付着する可能性のある標本を含む追加の標本がないか、皿をさらに3回渦

300個の瞳孔exeを選択したら、ペトリ皿からの残留物を幼虫トレイに戻し、ペトリ皿をエタノールですすいでください。次に、残留物を幼虫トレイから空のサンプルジャーに移します。日付と産地のラベルを瓶に追加し、蓋を瓶の上に置いてサンプルを分類します。

ラベル付けされたバイアルから瞳孔のexusを、標本を覆うのに十分なエタノールで満たされたペトリ皿に注ぎます。次に、実体顕微鏡下で、Chiron Pub exの外部形態学的特性を使用して標本をmorph axaに分離し、異なるmorph Axaを別々に標識されたバイアルに移します。エタノールまたはCeli thaxで分類する際の例で満たされた4分の3は、標本を区別するために胸角の存在、サイズ、形状、および色の違いを使用します。

腹部で分類する場合は、腹部と肛門葉の棘、毛、棘を使用して形態を分離します。選別後、各morph軸索のマルチウェルプレートの1ウェルを95%ethanolで満たし、各morpho分類群の複数の表現をプレートの個々のウェルに少なくとも10分間配置して、十分な乾燥を確保します。次に、サンプルが乾燥している間に、適切なサイトコレクションと識別情報でスライドにラベルを付け、人のexusをマウントします。

スライドのテンプレートを顕微鏡のステージにテープで貼り付け、このテンプレートの上にスライドを置きます。次に、URLをスライドに一滴広げて、カバースリップのサイズに近づけ、鉗子を使用して最初のモーフ軸索の代表者を実験室のワイプに優しくたたいて、余分なエタノールを取り除きます。次に、URLに標本を埋め込み、背骨先端の鉗子と解剖プローブを使用して、腹部から脱皮

この手順の最も難しい側面は、スライドマウント中に腹部からセファロンタックスを解剖するために必要な手先の器用さを開発することです。解剖を成功させるには、細い先端の鉗子または解剖プローブを使用して、頭側タックスと最初の腹部セグメントの間でexeを分離します。示されているように、頭蓋タックスをエサル縫合糸に沿って分割します。

次に、縫合糸の端が反対側になるように頭側タックスを開き、腹側が間隔を空けるように向きを変えます。腹部の背側を上にして、セファタックスのすぐ下に置きます。次に、カバースリップを斜めに保持し、スライドに1インチ触れるようにゆっくりと下げて、カバーを落下させて気泡の形成を減らします。

最後に、カバースリップを軽く押して標本を平らにし、複合顕微鏡を使用してスライドマウント標本の属を決定しますこれらのグラフでは、ミネソタ州の16の都市湖から収集された瞳孔exサンプルの分類学的蓄積曲線が示されています各湖内の一般的な種の数を決定します。各データラインは湖の1つを表し、各データポイントは2005年4月から10月までに収集された月次サンプルを表しており、湖ごとに4つのサンプルを取得することでカイロンコミュニティの大部分が回復し、湖内の重要な季節変動を検出したことを示しています。湖の深さやリン濃度などの環境変数の変化は、湖の化学的性質の勾配全体で検出される累積種に影響を与える可能性があるため、ミネソタ州全体の湖の気候変動を評価するために、カイロンの長期モニタリング研究を使用できます。

実際、このグラフが示すように、平均リン濃度と平均深度の比率が増加するにつれて、遭遇する種の累積数は増加します。瞳孔の滲出液の収集を成功させるための最も重要なステップは、研究領域内で滲出液の蓄積が多い領域を特定することです。ラボでサンプルを開始するときは、一部の標本が軽く着色され、シャーレのサイズに付着する可能性があるため、シャーレの内容物をゆっくりとスキャンすることが重要です。

このビデオを見た後、水質の監視と評価を目的としたプロジェクトのために、omie表面浮遊瞳孔exサンプルを収集して処理する方法を十分に理解しているはずです。