利用酶生物传感器的量化内源性ATP或H ₂ 0 ₂在肾脏

这些程序的总体目标是测量整个肾脏中 TP 和过氧化氢的实时内源性间质浓度。这是通过首先将离体和体内应用的传感器再水化和校准到已知浓度的 TP 和过氧化氢来实现的。对于离体传感器安装，通过手术对肾脏进行器械作并从血液中清除。

该程序是通过主动脉冲洗肾脏来进行的。然后手术分离大鼠肾脏，置于记录室中并灌注生理盐水。答：使用离体传感器测量 TP 和过氧化氢以进行体内手术。

做一个切口，以便观察血液灌注的肾脏。将肾脏放置在陈旧的蒸馏帽中，并且可以安装间质导管用于药物应用。使用体内传感器进一步测量肾间质 A TP 和过氧化氢浓度。

最终，这些协议促进了酶微电极生物传感器在肾间质中进行实时 a TP 和过氧化氢测量。酶生物传感器的主要优点是它们能够直接测量生物组织中的内源性间质浓度。该技术用于检测离体 seline 灌注肾间质或体内的 TP 和过氧化氢浓度。

酶生物传感器的精度能够实时测量细胞外 A TP 或过氧化氢浓度的基础和动态调节。这些测量可以确定功能不同的肾脏区域的药物应用或疾病概况。将 A TP 和零传感器的尖端放入含有缓冲液 A 的单独再水化室中，在 2 至 8 摄氏度下至少水化 10 分钟，以再水化。

打开双通道 POTENTIA stat 并启动记录系统软件。将程序设置为将数据保存为 A-S-C-I-I 代码，并将传感器极性设置为阳极正。准备一个装有 3 毫升缓冲液的校准室，将参比电极降低到腔室中。

从解除冻结中删除每个传感器。将它们连接到微型机械手上，然后将它们插入校准室溶液中。在高性能实验室空气台上的法拉第笼中执行所有校准和研究，以降低信号噪声。

在高温测量记录期间。对校准室中的离体传感器执行循环体积遥测。通过以每秒 100 毫伏的速率将传感器从负 500 毫伏循环到正 500 毫伏，持续 10 个周期，这大大提高了传感器的灵敏度，将传感器极化到正 600 毫伏。

在最后一个周期之后，传感器电流将衰减到 asim 手提袋。至少 5 分钟后即可获得研究读数。连续记录零读数，将一定量的 TP 溶液加入腔室中，以产生包含 A TP 传感器所需检测范围的校准线。

A TP 解决方案最初会在传感器信号中产生一个尖峰，然后随着 A TP 在整个腔室中均匀扩散而衰减。信号电平稳定后，应记录信号值。对于每添加一次 A TP，从每毫升 2 毫克的储备液中加入 3 微升蒸发液，以测试 A TP 传感器的特异性。

TP 应用产生的电流应降低到零水平，连续向腔室中加入一定量的过氧化氢溶液，以产生包含零传感器检测范围的校准线，一旦信号水平稳定，应记录信号值。对于每添加一次过氧化氢，从每毫升 2 毫克的原液中加入 3 微升牛花边，以测试零传感器的特异性。过氧化氢应用产生的电流应降低到离体研究的零读数。

乳糜泻和肠系膜上动脉以及这些动脉上方的腹主动脉周围的 Rapa 结扎。但不要结扎 代表肾动脉下方腹主动脉周围的两个结扎线。将腹主动脉结扎在肾动脉下方的远端。

主动脉夹在结扎线上方和肾动脉下方至少一厘米处。在最低结扎线和夹子之间用聚乙烯管插入腹主动脉。用第二主动脉结扎固定导管。

取下夹子并结扎肠系膜动脉和腹腔动脉以及这些动脉上方的主动脉。在室温下以每分钟 6 毫升的速度用 Hank 平衡盐溶液灌注肾脏 2 到 3 分钟，直到肾脏完全变白。此外，肾静脉可以插管以收集流出液。

使用手术镊子小心地取出肾包膜，这是插入传感器所必需的。切除肾脏，包括主动脉的导管连接部分。将肾脏放入装满沐浴液的 3 毫升培养皿中。

通过空心主动脉以每分钟 650 微升的恒定速率用浴液灌注肾脏。用绑在肾脏上的橡皮筋固定肾脏，并用别针固定在硅胶涂层培养皿上。将参比电极放在培养皿中靠近肾脏的位置，将其尖端浸入浴液中。

放置微型纵器，以便将传感器快速插入肾脏。或者，使用连接到每个微型机械手的假探针来帮助实现每个传感器的传感器所需放置，持续时间不超过 20 秒。从再水化室中取出传感器，连接到微型机械手，然后将传感器插入洗碗液中。

如果预计会长时间暴露在空气中，请在每次曝光时将传感器短暂浸入甘油溶液中。将具有电位统计的传感器极化至正 600 毫伏，并允许电流流向 Asim 手提袋。将每个传感器推进到肾脏中的相同深度。

根据文本协议进行数据分析。酶微电极生物传感器的设计允许实时检测分析物和整个肾脏，以获得可重复的结果。准确的前后校准至关重要。

该图显示了 TP 传感器校准期间 X pvo、TP 和零点传感器产生的信号的代表性轨迹。校准过程生成用于计算 TP 动态变化的线性拟合。通过向浴液中加入已知的过氧化氢浓度来校准零传感器，并记录 asim 到 am 的参数值。在浴液中添加催化剂会导致电流快速衰减。

体内传感器产生类似的迹线，但检测的是还原电流而不是氧化电流，因此电流为负校准还产生 0.3 至 80 微摩尔范围内的线性拟合。此处显示了体内传感器对 TP 相对于其他嘌呤产物的特异性。该图证明血管紧张素 2 诱导耐盐和盐敏感大鼠新鲜分离的肾脏间质内源性过氧化氢浓度变化。

血管紧张素 2 诱导双侧肾脏急性释放过氧化氢。然而，盐敏感大鼠肾脏中的最大振幅显着升高，尤其是在喂食高盐饮食时。在尝试此过程时，重要的是要记住传感器尖端和肾皮层表面很脆弱，因此，损坏任何一个都会损害准确的记录。

看完这个视频，你应该对如何测量内源性物质和肾脏等整个器官有了很好的了解。您还将能够准确地执行校准和成功记录所需的外科手术。我们应用这种方法来研究 TP 和过氧化氢罗勒水平，它们在肾脏中释放。

然而，当使用相应的传感器时，相同的方法可用于测定腺苷谷氨酸、葡萄糖和其他一些物质的浓度。