Subcutánea angiotensina II infusión usando osmótica Bombas Induce aneurismas aórticos en ratones

El objetivo general de este procedimiento es estudiar las características patológicas y los mecanismos moleculares de los aneurismas aórticos en ratones. Esto se logra preparando primero una bomba osmótica con una solución de angiotensina dos. A continuación, se hace una bolsa en la piel del lomo del animal en la que se inserta la bomba.

En última instancia, la dilatación de la aorta en las regiones aórtica torácica y abdominal puede evaluarse mediante imágenes ex vivo. Así que primero implementamos esta técnica porque realmente queríamos definir el papel de la presión arterial cuando estábamos infundiendo angiotensina para promover el desarrollo de la aterosclerosis. Deborah Hart y Angio Banan, ambos miembros del Centro de Investigación Cardiovascular de Soha, demostrarán el procedimiento para llenar las bombas osmóticas.

Comience registrando el número de lote de las bombas y los moderadores de flujo incluidos con el cuerpo principal de la bomba y el flujo. Moderador con guantes para evitar transferir aceite de manos a la carcasa exterior de la bomba. A continuación, abra solo el número de bombas y moderadores de flujo necesarios para el estudio.

A continuación, pese cada bomba, incluyendo tanto el cuerpo principal como el moderador de flujo, anotando el peso con cuatro decimales. Este peso, denominado peso de la bomba vacía en la plantilla, se utilizará para calcular la proporción de llenado cuando se hayan pesado todas las bombas. Conecte la aguja de llenado de la bomba a una jeringa estéril de un cc y llene cuidadosamente la jeringa con una solución de angiotensina dos recién preparada del tubo de plástico con el número adecuado.

Retire con cuidado todas las burbujas de aire de la jeringa con la aguja colocada hacia abajo. A continuación, mantenga la jeringa en esta posición para evitar la introducción de burbujas en la bomba. Inserte suavemente la aguja de llenado en el cuerpo de la bomba.

Cuando la aguja esté en su lugar, avance la punta dentro de la bomba hasta que toque la parte inferior de la bomba. A continuación, presione lentamente el émbolo para dispensar aproximadamente 246 microlitros de la solución. La sombra oscura dentro de la bomba se puede utilizar para controlar el nivel de llenado.

La bomba está llena. Cuando una gota de líquido se eleva fuera de la bomba, retire con cuidado la aguja e inserte el moderador de flujo en la bomba a través del orificio en la parte superior del cuerpo de la bomba hasta que no se vea ningún espacio entre la cabeza del moderador de flujo y la parte superior del cuerpo de la bomba. Seque con cuidado cualquier fuga de líquido adicional que resulte de la inserción.

A continuación, pese la bomba llena y registre el peso en la bomba adecuada, la celda llena de peso en la plantilla. A continuación, la proporción de llenado se puede calcular utilizando la fórmula, y estos datos se pueden introducir en la celda de la proporción de llenado de la plantilla. Idealmente, la relación de llenado debe ser igual o superior al 95%Cuando la bomba esté llena, colóquela en un tubo de plástico estéril de cuatro mililitros correspondiente apropiado con la cabeza del moderador hacia arriba y agregue un volumen suficiente de solución salina estéril para cubrir la bomba.

Luego, cuando se hayan almacenado todas las bombas, coloque los tubos en una incubadora a 37 grados centígrados durante al menos 12 horas para permitir el cebado parcial de las bombas el día de la implantación. Con una bata, mascarilla y guantes, afeitar un área del tamaño de una moneda sobre el hombro de un ratón anestesiado y transferir al animal a una capucha laminar. Después de colocar ungüento en los ojos del animal y confirmar la falta de respuesta al dedo del pie, pellizque, frote y limpie el área afeitada con Betadine, seguido de tres toallitas con etanol al 70%.

A continuación, utilice un bisturí quirúrgico esterilizado en autoclave para hacer una incisión de un centímetro en la piel perpendicular a la cola y detrás de la oreja sobre el omóplato de la pata delantera. Luego, con pinzas en una mano, abra la incisión con un hemostático. Por otro lado, realiza un túnel subcutáneo por debajo de la piel avanzando la punta del hemostático hacia la cola.

Abra con cuidado las mordazas del hemostático para abrir una bolsa para la bomba. A continuación, sustituya el hemostático por la bomba correspondiente adecuada con el cabezal moderador situado en la parte trasera del ratón, y empuje suavemente la bomba completamente en el bolsillo. Debe haber suficiente espacio libre para cerrar la herida sin tensión ni estiramiento de la piel.

Una vez que la bomba esté en posición, apriete y estire firmemente ambos lados de la incisión para que los bordes se unan y cierre la piel con una o dos pinzas para heridas. Inspeccione el sitio de la incisión para asegurarse de que la herida esté completamente cerrada y que la bomba no esté presionando directamente sobre la incisión. Luego, use un hisopo de algodón limpio para aplicar crema tópica de lidocaína en el área.

Finalmente, transfiera el mouse a una almohadilla térmica hasta que recupere la conciencia y luego devuelva al animal a su jaula. En este experimento, después de cuatro semanas de angiotensina, dos infusiones de bombas implantadas como se acaba de demostrar, estas aortas se recolectaron de ratones knockout de receptores de lipoproteínas de baja densidad para la visualización de sus dilataciones aórticas. Como se observa en las imágenes, las aortas exhibían varias características diferentes, incluida la expansión de la región suprarrenal, la expansión de la región ascendente o la expansión de ambas regiones con un ratón que exhibía una morfología macroscópicamente normal.

A continuación, se cuantificó la dilatación de la aorta abdominal midiendo la anchura máxima ex vivo de la región sénal, como se ilustra en la línea roja para medir la dilatación aórtica ascendente. A continuación, se abrió la aorta y se fijó como se muestra. Se midió la superficie íntima en la región aórtica ascendente con las reglas en cada una de ellas y se incluyeron las imágenes correspondientes para garantizar la estandarización de las mediciones una vez dominadas.

Este procedimiento no debe tardar más de cinco minutos en completarse por masa.