דוגמנות אנצפלופתיה של פגות שימוש בהריון היפוקסיה-איסכמיה עם lipopolysaccharide Intra-השפיר בחולדות

המטרה הכוללת של הליך כירורגי זה היא לספק מודל ניתן לשחזור של פגיעה מוחית הקשורה ללידה מוקדמת במיוחד, באמצעות אינדוקציה של היפוקסיה מערכתית חולפת, איסכמיה ודלקת תוך מי שפיר לסיכום, אי ספיקת שליה ודלקת כוריו-מי שפיר בחולדות. שיטה זו יכולה לעזור לענות על שאלות מפתח לגבי הפתוגנזה של פגיעה מוחית סביב הלידה הנובעות מתהליכים תוך רחמיים המאפשרים פיתוח אסטרטגיות טיפוליות מכוונות. היתרון העיקרי של טכניקה זו הוא בכך שהיא גורמת לפגיעה מערכתית המחקה עלבונות תוך רחמיים הן מזיהום והן מהיפוקסיה, איסכמיה המייצרת ליקויים נוירולוגיים תפקודיים בחולדה הבוגרת.

מודל זה מתאים במיוחד לניתוח מנגנוני הפגיעה הקשורים לדלקת. מכיוון שניתן לבדוק את ההיפוקסיה, האיסכמיה והגירויים הזיהומיים בנפרד או כפציעה משולבת, תדגים את ההליך לינדזי צ'אן, טכנאית מהמעבדה שלנו. לפני תחילת ההליך, השתמש בקוצץ בעלי חיים קטנים כדי להסיר את כל השיער מאזור הבטן התחתונה של יום עוברי.

18 חולדה בהריון בתבנית מלבנית, מקפידה לא לחתוך את הפטמות או ליצור פריחה בסכין גילוח. לאחר מכן, בעזרת צמר גפן סטרילי, שפשפו את העור בשלוש מריחות לסירוגין של יוד פובידון ואתנול 70%. כאשר העור יבש, אשר את עומק ההרדמה המתאים על ידי הבוהן, צבט ועטוף את החיה.

לאחר מכן השתמש באזמל כדי לבצע חתך בקו האמצע של שלושה סנטימטרים בבטן החיה, ואחריו דיסקציה קהה של שכבת העור מהפאשיה הבטנית בעזרת מספריים. שימוש במלקחיים ומספריים כירורגיים. הרם את שכבת הפאשיה הבטנית ובצע חתך דרך המרפק הליניארי של כלי הדם.

כאשר חלל הצפק נחשף, הניחו גזה כירורגית על החלק החיצוני של החתך והרטיבו את הגזה במי מלח סטריליים. לאחר מכן, בעזרת מלקחיים קהים ולחץ חיצוני על הבטן, הסר בעדינות את קרני הרחם מחלל הצפק וסדר את הקרניים על הגזה הרטובה. הקפידו להימנע מהסתבכות ומגע עם המעיים, השתמשו רק ברקמת השריר בין שקי מי השפיר הבודדים כדי לסדר את העוברים.

לאחר מכן באמצעות דיסקציה קהה, חשוף ובודד את ארבעת עורקי הרחם. הקפדה לא לפגוע בכלי הדם האימהיים כאשר העורקים מבודדים. הנח קליפ מפרצת חולדה בגודל 30 על כל כלי לפני מריחת הקליפים, חשוב לוודא שכל הרקמה שמסביב נקייה לחלוטין.

בעת הנחת הקליפים, אבטח אותם עם המלקחיים הבוטים ולאחר מכן הנח אותם במקביל. התבוננות בהפסקת הדופק היא קריטית כדי להבטיח איסכמיה היפוקסיה מלאה כאשר כל הקליפים הוצבו. אשר את הפסקת הפולסים הפרוקסימליים והדיסטליים ואת התכהות כלי הרחם, כולל בשליה הבודדת.

לאחר מכן מכסים את כל השדה הניתוחי בגזה ומשקים את הרקמה במי מלח סטריליים. כל 10 דקות למשך שעה לאחר 60 דקות, הסר את הגזה והשקה שוב את השדה. כאשר קרני הרחם וכלי הדם לחים כראוי, השתמש במלקחיים כדי להסיר בעדינות כל קליפ מפרצת, הקפד לא לגרום לטראומה לכלי הדם ולשמור על שלמות הרקמה.

ואז להשקות היטב את הקרניים והשדה. פעם אחרונה, תוך הקפדה על הסרת חוטי גזה תועים משקי מי השפיר. כדי לטפל בעוברים עם LPS, השתמש במלקחיים קהים כדי לייצב ולסובב כל שק מי שפיר כך שהבסיס של כל שק מי שפיר בודד יהיה גלוי.

לאחר מכן טען מזרק אינסולין דק במיוחד של 0.3 מיליליטר עם מחט מחוברת של שמונה מילימטר 31 עם תמיסת LPS והזריק 100 מיקרוליטר מהתמיסה ממש לפני כל לוחית שליה. עם הסרת המחט, הפעל לחץ ישיר על שק מי השפיר כדי לעצור כל דליפת נוזלים. החדרת מחט עדינה במיוחד בגודל 31 בבסיס שק מי השפיר היא קריטית לאספקת LPS תקינה מבלי לאפשר למי שפיר לברוח.

לאחר השקיית קרני הרחם שלוש פעמים במי מלח סטריליים, השתמש במלקחיים כדי להחזיר את הקרניים לחלל הצפק. לאחר מכן השתמש בתפר משי 3 oh רץ כדי להעריך מחדש את קצוות שכבת השרירים מבלי לתפור לתוך שק או דרכו, ולאחר מכן סגירת העור עם תפר משי נוסף 3.0. לאחר מכן, השתמש במחט בגודל 26 לתת-עורית.

יש להזריק מיליליטר אחד של 0.125% בופיבקאין סביב קצוות הפצע. יש לייבש את החולדה במגבת לפי הצורך, להזריק 0.1 מיליגרם לק"ג בופרנורפין בעורף. הניחו את בעל החיים בכלוב ביתי נקי עם ניטור עד להחלמה מלאה.

לאחר איסכמיה היפוקסיה מערכתית חולפת ומתן LPS ביום העוברי 18, כפי שהוכח זה עתה, צביעת het ו-eosin מגלה חריגות היסטופתולוגיות משמעותיות הן בשליה והן במוח. ואכן, שליה שנבדקה בימים העובריים 19 ו-21 פולטת באופן גס עם מיקרו דימום ונמק לאורך הדצידואה והמבוך. נצפתה גם חדירה דלקתית משמעותית וכלי דם מוגברים.

מוחות נוספים שנבדקו ביום השני לאחר הלידה מגלים מגליה חדרית, כמו גם אובדן נוירונים של חומר לבן ותת-צלחת בהשוואה להיפוקסיה מערכתית חולפת, איסכמיה ו-LPS גם הפחיתו משמעותית את הביטוי של אשלגן כלורי קוטרנספורטר שני חלבון, קוטרנספורטר כלוריד מרכזי להתפתחות עיכוב GABAergic בקליפת המוח ביום 15 לאחר הלידה, מה שעולה בקנה אחד עם הוויסות ההתפתחותי הלקוי שנצפה במהלך התקופה הקריטית שלאחר הלידה של הבשלת המעגל. לאחר צפייה בסרטון זה, אמורה להיות לך הבנה מוצקה כיצד לבצע ניתוח זה בחולדות בהריון וכיצד לגרום לאיסכמיה היפוקסיה חולפת לפני הלידה באמצעות חסימת עורק הרחם עם דלקת ברחם באמצעות הזרקה תוך מי שפיר של תמיסת ליפופוליסכריד. לאחר שליטה, ניתן להשלים טכניקה זו תוך 90 דקות אם היא מבוצעת כראוי.