Name: Fare Matrix Jel Plug Test kullanma İnsan endotel-pericyte Etkileşim Vivo Çalışmasında (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-12-19T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Öğrenin, fare matriks jel plug testi ile insan endotel-perisit etkileşimlerini in vivo ortamda nasıl çalışacağınızı. Bu yöntem, anjiyogenez ve damarsal bozukluklara yönelik sinyal yollarını araştırmada kullanılır.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Dr. K. Yuan, Amerikan Kalp Derneği Bilim İnsanı Geliştirme Hibesi (15SDG25710448) ve Pulmoner Hipertansiyon Derneği Kavram Kanıtı Ödülü (SPO121940) tarafından desteklenmiştir. Dr. V. de Jesus Perez, Robert Wood Johnson Vakfı'ndan kariyer geliştirme ödülü, NIH K08 HL105884-01 ödülü, Pulmoner Hipertansiyon Derneği Ödülü, Amerikan Akciğer Derneği'nden Biyomedikal Araştırma Ödülü ve Translasyonel Araştırma ve Uygulamalı Tıp ile desteklenmiştir. Stanford Üniversitesi'nden ödül.

Etik Beyanı: Hayvan denekleri Prosedürleri Stanford Üniversitesi Tıp Okulu&#39;nda Kurumsal Hayvan Bakımı ve Kullanımı Komitesi tarafından onaylanmıştır. NOT: Hayvanlar% 3 buharlaştırıcı izofluran ve O 2 gazının% 3 kaynağı ile anestezi altında bulunmaktadır. gözleri veteriner merhem kullanılması anestezi altında iken kuruluğunu önlemeye yardımcı olabilir. 1. Hücre Hazırlanması <ol><li> Uygun ortam, 10 ml 100 mm plakalarında insan endotel ve perisit hücre kültürleri büyütün. hücreler kadar 3 gün% 80 confluency ulaşmak - her 2 taze ortam 10 ml değiştirin. <ol><li> şirketi ile desteklenmiş tam endotel hücre ortamı (ECM) Kültür endotel hücreleri (EC),% 5 fetal sığır serumu (FBS),% 10 penisilin / streptomisin ve% 10 endotel hücre büyüme takviyesi verilir. </li><li> şirket ile desteklenmiş tam perisit medya (PM) Kültür perisitler% 2 FBS,% 10 penisilin / streptomisin ve% 10 perisit büyüme takviyesi verilir. </li&gt; </ol></li><li> Hücre karışımları hazırlayın <ol><li> deney ve kontrol grupları için hücrenin gerekli sayısını hesaplayın. NOT: Deney grubunda her fiş bir milyon (x 10 6 1) İnsan ECS ve iki yüz bin (2 x 10 5) perisitleri içerir. Kontrol grubu için, her fiş, 1.2 milyon insan ECS sadece içerir. Negatif kontrol grubu, matris jel imkanına sahiptir. Her bir grup, fişler bir fare alt sırt bölgesinin her iki tarafında enjekte edilebilir iki fare gerektirir en az dört fişler, içermelidir. Üç fişler deney için üç nüsha olarak hizmet edecek ve dördüncü durumda tek başarısız kullanılabilir. jel ekstra hacim maç için% 25 ekstra hücreleri hazırlayın. </li><li> Toplayın ve kültür plakalarından hücreleri saymak. <ol><li> hücreleri ayırmak için, ortamını çıkarın ve oda sıcaklığında 1 x fosfat tamponlu tuzlu su (PBS) ile bir kez yıkanır. PBS kaldır 1 mi% 0.25 tripsin / 2.21 mM EDTA ekleyin ve 1 dakika boyunca inkübe edin. 2 ekleyerek plaka kapalı hücre yıkayınml&#39;lik ortam ve 15 ml bir tüp içinde toplanır. </li><li> üreticinin talimatlarına göre bir hemositometre kullanılarak hücre sayısı. </li><li> 5 dakika boyunca 400 xg&#39;de bir pelet içine hücrelerin uygun sayıda santrifüj. Deney grubu, santrifüj EC ve aşağı birlikte tek pelet haline perisitler hem. </li></ol></li></ol></li></ol> 2. Matris jel çözeltisi, <ol><li> 4 saat ya da homojen bir çözelti elde etmek için gece boyunca 4 ° C&#39;de tam matris jel çözülme. Hiçbir karıştırma gereklidir. </li><li> 4 ° C&#39;de kısım matrisi 1.5 ml tüpler jel saklayın. </li><li> Ön-soğutma, steril 1.5 ml tüpler 4 ° C&#39;de 28 G 1 cc insülin şırıngası. Dikkat: Her zaman buz üzerinde matris jel tutun. </li><li> 1 bir hacim oranında bFGF soğuk matris jel karıştırın: 100 (bFGF nihai konsantrasyon = 0.5 ug / ml bFGF stok çözeltisi = 50 ug / ml) birçok kez aşağı yukarı pipetleme matris jel çözeltisi karıştırıldıktan sonra buz üzerinde inkübe 60 dk b - 30efore adım 3.1 hücrelerle karıştırılması. NOT: karıştırmadan önce stok bFGF çözülme. Enjeksiyon için gerekli fişleri sayısını hesaplayın. Örneğin, her bir fiş 200 ul matris jel gerektirir. Bu nedenle,% 25 ekstra jel hazırlamak. </li></ol> Hücreleri 3. karıştırın Matrix Jel <ol><li> Her bir grup için, bFGF ihtiva eden matris jel hesaplanan hacmi (uygun hücre sayısı ihtiva eden) hücre pelletini. köpük önlemek ve farenin enjeksiyon için hazırlanmaktadır kadar buz üzerinde 15 ml tüp içinde bırakmak için yavaşça karıştırın. </li></ol> 4. Fare Hazırlama <ol><li> Indüksiyon odasında% 3 İsofluranın 5 dakika artı% 3 O 2 için 1 SCID fareler anestezi. Bir seferde tek deney grubunda, ya da 2 fareler üzerinde odaklanın. </li><li> aşağı bir ısıtma yastığı ventral tarafta, indüksiyon odasından yer fareyi çıkarın ve hızlı bir şekilde enjeksiyonundan boyunca anestezi sağlamak için olmayan bir geri soluma sistemi aracılığıyla farenin yüzüne burun ağzına takılırSeçim sürecinde. Olmayan geri soluma sistemine indüksiyon odasına gaz akışını açın ve% 1.5 İsofluranın ve% 1.5 O 2 gaz basıncını düşürmek. </li><li> Bir tıraş makinesi veya tüy dökücü krem ​​(1 cm çapında etrafında) her iki lateral arka bölgelerden saç kaldırmak. </li><li> % 70 alkol ped ile cilt alanını silin. </li><li> indüksiyon odasına fare dönün ve tekrarlayın 4.2 adımları - 4.4 saniye fare ile. </li></ol> 5. Matris Jel Enjeksiyon <ol><li> olmayan geri soluma sistemi takılarak aşağı ısıtma yastığı ventral tarafta koyarak enjeksiyon için bir fare hazırlayın. </li><li> Bir seferde bir ön-soğutulmuş 28 G 1 cc insülin şırınga bir fare içine matris jel yükleyin. <ol><li> şırınganın içine iki fişler (200 fiş başına ul artı% 25 ekstra) için matris jel tam 500 ul hacmi yükleyin. </li><li> Make ce önlemek için enjektöre hücrelerin yüklenmesi 3 dakika içinde farelere matris jel enjekte eminşırınganın tarafına yerleşme ve şırınga içinde katılaşan gelen matris jel önlemek için rf. </li></ol></li><li> Daha sonra, deri altı boşluk bulmak göğüs kafesinin arka posterior deri altı uzaya yavaş yavaş ve eşit matris jel 200 ul enjekte geri cilt kaldırın. </li><li> enjeksiyon yerinde dışarı sızmasını matris jel önlemek için dikkatli olmak, yavaş yavaş enjeksiyon iğnesi çıkarın. Bir yumru enjeksiyon bölgesinde oluşturacaktır. alkol ped ile enjeksiyon bölgesini silin. </li><li> 1 dk ısı pad üzerinde matris jel jelleşme izin için daha sonra sırtında fare bırakın, fare arka diğer tarafında 5,5 - tekrarlayın enjeksiyon 5.2 adımları. </li><li> 14 gün sonra yumru tanımlamak için kalıcı bir kalem kullanarak her iki darbelere özetleyin. bazı saç geri büyür sonra, yumru bulmak daha kolay olacaktır. </li></ol> 6. Matris Jel Tak İzolasyon: 14 Gün Enjeksiyon sonrası <ol><li> hayvan teşhir ederek insanca fareler Euthanizeölümünü sağlamak için servikal dislokasyon tarafından takip karbondioksit inhalasyon&gt; 5 dk. </li><li> Farenin arkasından matris jel fişini çıkartın. <ol><li> Yavaşça fiş adımı 4.3 tekrarlayarak bulunduğu enjeksiyon yeri çevresinde regrown tüylerden. işaret çizgisi cilt altında orijinal yumru boyutunu gösterir. </li><li> sırasıyla, fişin alt ve üst tarafta takılı çevreleyen deri ve kas tabakaları ile birlikte fişi tüketim. <ol><li> ince cerrahi makas kullanarak, deriye dik fişin belirgin sınırında bir kesi yapmak ve fiş altındaki kas kesti. Daha sonra, dikkatli bir şekilde belirgin bir sınır boyunca tıpanın dış yüzeyi etrafında kesilir. </li><li> cilt ve kas tabakaları arasına sıkıştırılan tutarak fişi çıkarın. Hemen aşırı kan yıkayacak 1x PBS ile küçük bir beher durulayın. fiş (sonraki adım, 6.3) şimdi sabit hazırdır. </li></ol></li></ol></li><li> PLU&#39;nun Fix% 4 paraformaldehid içinde örn. <ol><li> Sallanan olmaksızın oda sıcaklığında, 24 saat süreyle% 4&#39;lük paraformaldehit, 25 ml ile 50 ml tüp içinde, deri ve kas tabakaları da dahil olmak üzere, tüm fiş, koyun. Bir sonraki gün, parafine önce başka bir 24 saat süre ile,% 70 etanol, 25 ml prize aktarın. NOT: dikkatli paraformaldehid tutun. Eldiven giy. </li></ol></li></ol> 7. Parafin Süreci Matrix Jel Tak <ol><li> parafine için fişi hazırlayın. <ol><li> Şekil 1a&#39;da gösterilen fiş Orient; fişin yüzü yukarı bakacak ve hem cilt ve kas tabakaları kesit sırasında ilk olarak kesilecek doku blok yüzeyi boyunca görünür böylece doku kasetine fişi yerleştirin. </li></ol></li><li> Parafin standart parafin gömme protokollere 13 göre fişi gömün. </li><li> mikroskop Accor slaytlar üzerine doku bloğu 10 indirim mikron kalınlığında kesitler ve montaj - 8 CutStandart parafin kesit protokolleri 13 artırılabilir. </li><li> boyama için hazır olana kadar oda sıcaklığında serin ve kuru bir yerde slaytlar saklayın. </li></ol> Hematoksilen ve Eosin Leke (H &amp; E) ile 8. Leke Bölüm 13 <ol><li> iki kez% 100 ksilen üzerinde kaydığı geçirilerek doku bölümleri de-paraffinize,% 100 etanol,% 95 etanol,% 70 etanol ve son olarak da 1 x PBS, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca her biri. Bir sonraki adıma kadar 1x PBS slaytlar bırakın. </li><li> Pipet 100 ul H &amp; E bölümü üzerine çözüm ve 1 inkübe - 5 dakika, ya da 10X büyütmede dik bir ışık mikroskop altında bakıldığında bir hücrede mavi çekirdekleri ve pembe sitoplazma arasında belirgin bir kontrast kalmayıncaya kadar. Herhangi bir H &amp; E çözüm hedefi dokunmasına izin için dikkatli olun. </li><li> musluk suyu büyük bir beher slayt dunking ile slayt yıkayınız H &amp; E çözümü, daha sonra beher bir rafa slayt yerleştirin ve 2 dakika süreyle akan su ile yıkayın. </li><li> Moslaytlar monte 9,8 adıma ettik. </li></ol> İnsan kılcal ve perisitlere 9. Leke Diğer Slaytlar <ol><li> iki kez% 100 ksilen üzerinde kaydığı geçirilerek doku bölümleri de-paraffinize,% 100 etanol,% 95 etanol,% 70 etanol ve son olarak da 1 x PBS, oda sıcaklığında 5 dakika boyunca her biri. Bir sonraki adıma kadar 1x PBS slaytlar bırakın. </li><li> antijen alma çözeltide bölümleri kaynatın. <ol><li> 2 L&#39;lik bir beher içinde, bir ısıtma bloğu üzerinde 95 ° C de antijen geri çözelti 1x sitrat tamponu (pH 7.0) kaynar hazırlar. </li><li> kaynama sonra, bir metal raf slaytlar yerleştirin ve 20 dakika için kaynar antijen alımı çözelti içinde daldırın. </li><li> Dikkatle de daldırılmış slaytlar ısıtma bloğundan beher çıkarın ve çözelti yavaş yavaş 30 dakika boyunca oda sıcaklığına dönmesi beklenmektedir. </li><li> Bir sonraki adıma kadar 1x PBS slaytlar yerleştirin. </li></ol></li><li> tampon engelleme bölümleri (1x PBS,% 5 Keçi Serum, 0 engelle.3% Triton X-100). <ol><li> Bir PAP kalemle her bölümün kenarlarında bir hidrofobik bir daire çizin. </li><li> tepsinin alt damıtılmış su olan bir nem tepsisine slaytlar yerleştirin. </li><li> Emin tüm doku yapım bölümleri üzerine Pipet 100 ul engelleme tampon sıvısı ile kaplıdır (100&#39;den fazla ul gerekebilir). </li><li> 1 saat süre ile blokaj tamponu ile bölümleri inkübe edin. </li></ol></li><li> primer antikor ile bölümleri inkübe edin. <ol><li> CD31 (EC) ve seyreltme tamponu içinde seyreltildi düz kas aktini (perisitler) için her bir bölümü (1 x PBS,% 1 BSA,% 0.3 Triton X-100), sonda için iki primer antikorlar ile bir çözelti hazırlayın. Not: Burada, bir anti-CD31 yoğunluğu 1:50 ve anti-düz kas aktini konsantrasyonu 1: 300. </li><li> gece boyunca damıtılmış su ihtiva eden bir nem tepsisine 100 ul primer antikorlar ile 4 ° C&#39;de bölümleri inkübe edin. </li></ol></li><li> 1x PBST (1x PBS +% 0.1 Twe içinde slaytlar üç kez yıkayın5 dakika, her yıkama için en20). </li><li> ikincil antikor ile bölümleri inkübe edin. <ol><li> seyreltme tamponu içinde seyreltilmiş anti-CD31 tavşan antikorunu tanıyan bir flüorofor konjuge keçi anti-tavşan ikincil antikoru ile bir çözelti hazırlayın. <ol><li> NOT: düz kas aktini primer antikor zaten CY3 fluorofor ile konjuge, bu nedenle herhangi bir ikincil antikor boyama gereklidir. 250: Keçi-anti-tavşan ikincil antikoru konsantrasyonu 1&#39;dir. </li></ol></li><li> damıtılmış su ihtiva eden nem tepsisine 100 ul sekonder antikor ile 1 saat boyunca bölümler inkübe edin. </li></ol></li><li> 5 dakika, her yıkama için 1x PBST slaytlar üç kez yıkayın. </li><li> slaytlar monte edin. <ol><li> Her bölümü üzerine DAPI nükleer boyanma ile antifade montaj çözümün - (60 ul ~ 40) - Pipet 2 3 damla. </li><li> Yavaşça bir yer yok. sıvı bölümleri yayılmış için izin bölümleri ve montaj çözümü üzerinde ve kenarlarında 1.5 kapak kaymaKapak kayma. Yavaşça bölümünün üzerine yerleştirilebilir hava kabarcıklarını dışarı basın bir parmağınızı kullanın. </li><li> slaytlar dokunmadan önce en az 1 saat kurumasını bekleyin. </li></ol></li></ol> 10. nicelik değerlendirmesini Kılcal Yoğunluk ve Yapı 14 <ol><li> H &amp; E boyanmış kesitlerde kılcal damarların sayısını, # / mm 2 olarak ifade edilir. <ol><li> 40X büyütme altında dik bir ışık mikroskobu dört farklı alanlarda fotoğrafları edinin. Not: Kapiler kırmızı kan hücreleri ile dolu borular olarak tanımlanır. </li><li> Seçenek olarak ise, yerine el sayım kılcalların, örneğin damar sayısı, ortalama damar uzunluğu ve çapı ve branş noktası gibi çeşitli anjiyojenez parametrelerini ölçmek için görüntü analizi yazılımı (ör Wimasis Görüntü Analizi) kullanın. </li></ol></li><li> immunofluorescent boyanan kesitler kılcal yapısını analiz eder. <ol><li> bir ters floresan mikroskop dört farklı alanlarda fotoğrafları EdinmeFITC ve TxRed filtre küpü ile. <ol><li> 488 nm dalga boyunda eksitasyon görüntü EC bir FITC küp kullanın ve 594 nm dalga boyunda eksitasyon görüntü perisitlere bir TxRed küp kullanın. <style type="text/css">p.p1 {margin: 0.0px 0.0px 0.0px 0.0px; font: 8.0px Arial}
			</style><style type="text/css">p.p1 {margin: 0.0px 0.0px 0.0px 0.0px; font: 8.0px Arial}
span.s1 {letter-spacing: -0.1px}
			</style><style type="text/css">p.p1 {margin: 0.0px 0.0px 0.0px 0.0px; font: 8.0px Arial}
span.s1 {letter-spacing: -0.1px}
			</style><style type="text/css">p.p1 {margin: 0.0px 0.0px 0.0px 0.0px; font: 8.0px Arial}
span.s1 {letter-spacing: -0.1px}
			</style></li></ol></li></ol></li></ol>

<ol><li>Risau, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanisms+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanisms of angiogenesis.</a> Nature. 386 (6626), 671-674 (1997).</li>
<li>Ribatti, D., Nico, B., Crivellato, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+pericytes+in+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Int+J+Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">The role of pericytes in angiogenesis.</a> Int J Dev Biol. 55 (3), 261-268 (2011).</li>
<li>Koh, W., Stratman, A. N., Sacharidou, A., Davis, G. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+three+dimensional+collagen+matrix+models+of+endothelial+lumen+formation+during+vasculogenesis+and+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Enzymol%22%5BJournal%5D)">In vitro three dimensional collagen matrix models of endothelial lumen formation during vasculogenesis and angiogenesis.</a> Methods Enzymol. 443, 83-101 (2008).</li>
<li>Liu, Y., Senger, D. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-specific+activation+of+Src+and+Rho+initiates+capillary+morphogenesis+of+endothelial+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Matrix-specific activation of Src and Rho initiates capillary morphogenesis of endothelial cells.</a> FASEB J. 18 (3), 457-468 (2004).</li>
<li>Grant, D. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interaction+of+endothelial+cells+with+a+laminin+A+chain+peptide+%28SIKVAV%29+in+vitro+and+induction+of+angiogenic+behavior+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Physiol%22%5BJournal%5D)">Interaction of endothelial cells with a laminin A chain peptide (SIKVAV) in vitro and induction of angiogenic behavior in vivo.</a> J Cell Physiol. 153 (3), 614-625 (1992).</li>
<li>Madri, J. A., Pratt, B. M., Tucker, A. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Phenotypic+modulation+of+endothelial+cells+by+transforming+growth+factor-beta+depends+upon+the+composition+and+organization+of+the+extracellular+matrix%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Phenotypic modulation of endothelial cells by transforming growth factor-beta depends upon the composition and organization of the extracellular matrix.</a> J Cell Biol. 106 (4), 1375-1384 (1988).</li>
<li>Brooks, P. C., Montgomery, A. M., Cheresh, D. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Use+of+the+10-day-old+chick+embryo+model+for+studying+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol+Biol%22%5BJournal%5D)">Use of the 10-day-old chick embryo model for studying angiogenesis.</a> Methods Mol Biol. 129, 257-269 (1999).</li>
<li>Yuan, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Activation+of+the+Wnt%2Fplanar+cell+polarity+pathway+is+required+for+pericyte+recruitment+during+pulmonary+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Activation of the Wnt/planar cell polarity pathway is required for pericyte recruitment during pulmonary angiogenesis.</a> Am J Pathol. 185 (1), 69-84 (2015).</li>
<li>Johns, A., Freay, A. D., Fraser, W., Korach, K. S., Rubanyi, G. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disruption+of+estrogen+receptor+gene+prevents+17+beta+estradiol-induced+angiogenesis+in+transgenic+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Endocrinology%22%5BJournal%5D)">Disruption of estrogen receptor gene prevents 17 beta estradiol-induced angiogenesis in transgenic mice.</a> Endocrinology. 137 (10), 4511-4513 (1996).</li>
<li>Chen, C. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+pericytes+for+ischemic+heart+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Human pericytes for ischemic heart repair.</a> Stem Cells. 31 (2), 305-316 (2013).</li>
<li>Richards, O. C., Raines, S. M., Attie, A. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+role+of+blood+vessels%2C+endothelial+cells%2C+and+vascular+pericytes+in+insulin+secretion+and+peripheral+insulin+action%5BTitle%5D)+AND+%22Endocr+Rev%22%5BJournal%5D)">The role of blood vessels, endothelial cells, and vascular pericytes in insulin secretion and peripheral insulin action.</a> Endocr Rev. 31 (3), 343-363 (2010).</li>
<li>Ricard, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+pericyte+coverage+mediated+by+endothelial-derived+fibroblast+growth+factor-2+and+interleukin-6+is+a+source+of+smooth+muscle-like+cells+in+pulmonary+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Increased pericyte coverage mediated by endothelial-derived fibroblast growth factor-2 and interleukin-6 is a source of smooth muscle-like cells in pulmonary hypertension.</a> Circulation. 129 (15), 1586-1597 (2014).</li>
<li>Buchwalow, I. B., Bocker, W. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aBuchwalow%2C+IB+%22Immunohistochemistry%3A+Basics+and+Methods%22">Immunohistochemistry: Basics and Methods</a>. , 1-153 (2010).</li>
<li>Tata, D. A., Anderson, B. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+method+for+the+investigation+of+capillary+structure%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurosci+Methods%22%5BJournal%5D)">A new method for the investigation of capillary structure.</a> J Neurosci Methods. 113 (2), 199-206 (2002).</li>
</ol>

Rakip mali çıkarlar dahil değildir.

Matris jel yatağından tahlili, angiogenesisin, in vivo olarak anjiyogenik ve anti-anjiyojenik bileşikler gen regülasyonu değerlendirmek ve in vitro testler tamamlamak için kullanışlı ve güçlü bir yöntem olduğu kanıtlanmıştır. Burada detaylı olarak damar oluşumu sırasında endotel hücrelerin ve perisitlerin arasındaki etkileşimi inceler insan anjiojenleri yeni bir matris jel yatağından tahlili tarif eder. Bu protokolde birkaç roman ve kritik adımlar vardır. Düşük geçiş (geçiş...

Anjiyogenez yeni kan damarları normal gelişim hastalığın kadar birçok alanda genelinde devam eden araştırma odağı önceden varolan damar ağı 1&#39;den oluşan ve bir olan süreçtir. Bu dinamik süreç çoğalmasını ve endotel hücreleri (EC) ve oksijen ve besin teslim 2 ihtiyacı sitede yöneliktir vasküler tüp oluşturmak için perisitlerin işe göç içerir. Bu işlem, aynı derecede dinamik bir tahlil, tüp oluşumu üç boyutlu yapısını özetlemek için en önemlisi bir gerektirir incelenmesi. In vitro 3D matris deneyleri bu ihtiyaca cevap vermek geliştirilmiştir ve araştırmacılar anjiyogenez yeri 3, 4, 5, 6 aldığı uzay ve zamanda ayrık adımları tanımlamak için izin de çalıştı. Bununla birlikte, bu in vitro olarak 3D matris modelleri perfüze olmayan damarları, bir eğitim sınırlıdırd nedenle anjiyogenez sürecine uygun kritik bileşenleri eksikliği (örneğin, damar yatak boyunca büyüme ve inhibitör faktörler, doğal olmayan gerginlik / kuvvetleri dolaşan) ve canlı dokuda mevcut karmaşık ortamında simüle etmek için başarısız. Bu sınırlama gidermek için, birçok in vivo anjiyogenez deneyleri raporumuzun 8, 9 odak noktası olacaktır matris jel fiş deneyi de dahil olmak üzere, 7 geliştirilmiştir. Matris jel fiş tahlil angiogeneziste farklı hücre ve maddelerin rolleri test etmek için sağlam bir platform sağlar olarak araştırmacılara hitap köklü in vivo anjiyogenez testtir. Matris jel 37 ° C &#39;de, bir jel-benzeri malzeme içine katılaşmaktadır Engelbreth-Holm-Swarm (EHS), fare sarkoma hücre çizgisi tarafından salgılanan bir ticari olarak temin edilebilir bazal membran çözümdür. Matris jel, büyüme faktörleri ve enjeksiyonundan gibi hücreler ve / veya maddeler ile karıştırılabilirfare içine deri altından cted. ev sahibi EC, 14 gün boyunca fişi işgal vasküler ağ oluşturacak ve konağın kanla perfüze hale gelecektir. Bugüne kadar, matris jel fiş deneyleri bu deney için ortak kültür endotel hücreleri ve perisitleri kullanılabilir olup olmadığını belirlemek için hiçbir çaba henüz yapılmamıştır, bizim bildiğimiz kadarıyla, ancak, anjiyogenez sırasında endotel hücre davranış çalışma odaklanmış olması bu iki hücre tipleri anjiyogenez sırasında nasıl etkileşimde çalışmak için. Özellikle, EC ve perisitlere arasındaki ilişkiyi anlamak mikrovasküler iskemi ve periferik vasküler hastalık 10, 11, 12 de dahil olmak üzere kan damarı kaybı patolojik olan hastalıkların, eğitim için değerlidir. Burada, insan EC ve fibroblast büyüme faktörü (bFGF) ile birlikte matris jel karışımına insandan türetilmiş perisitler getiren bir protokol açıklar. Bu karışım daha sonra deri altına enjekte edilebilirn, SCID farelerinin sırtı tam olarak işlevsel, perisit kaplanmış, hibrid damarlarının oluşumunu sağlamak için. Bizim protokol ile veya SCID fareleri ve nasıl kritik anjiyogenez bitiş noktaları için histolojik bölümleri analiz etmek, insan perisitlere, yerleştirme olmadan ya insan ECS içeren matris jel fişlerini hazırlamak açıklamaktadır.

<table><tbody><tr><td>PBS (Fosfat tamponlu salin)</td><td>Corning</td><td>21-031-CV</td><td></td></tr><tr><td>%0,25 Tripsin/0,53 mM EDTA</td><td>Corning</td><td>25-053-CI</td><td></td></tr><tr><td>Endotel Hücre Ortamı (ECM) kiti</td><td>Sciencell</td><td>1001</td><td>, her biri kolay karıştırma için uygun hacimde sağlanan besiyeri, EC büyüme takviyesi ve penisilin/streptomisin içerir</td></tr><tr><td>Perisit Medya (PM) kiti</td><td>Sciencell</td><td>1201</td><td>medya, Perisit büyüme takviyesi ve penisilin / streptomisin içerir, her biri</td></tr><tr><td>birincil insan pulmoner mikrovasküler endotel hücrelerinin</td> kolay karıştırılması için uygun hacimde sağlanır <td>Pulmoner Hipertansiyon Atılım Girişimi</td><td></td><td>bu hücre tipi ticari olarak da mevcuttur. 1-4 numaralı geçişte kullanılan hücreler</td></tr><tr><td>primer insan pulmoner perisitleri</td><td>Pulmoner Hipertansiyon Atılım Girişimi</td><td></td><td>Bu hücre tipi ticari olarak mevcut değildir, ancak beyin parisitleri vardır. Geçiş 1-4</td></tr><tr><td>bFGF'de kullanılan hücreler (temel Fibroblast Büyüme Faktörü)</td><td>Peprotech</td><td>100-18B</td><td>stok çözeltisi 50 &mu; PBS'de %0.1 BSA'da g/ml, 50 &mu'da alikotlar; l ve -20 derecede saklanır</td></tr><tr><td>Matrigel Basement Membran Matrix</td><td>BD</td><td>356237</td><td></td></tr><tr><td>28 G 1 cc Insluin Şırınga</td><td>BD</td><td>329410</td><td></td></tr><tr><td>SCID (Şiddetli Kombine İmmün Yetmezlik) fareleri</td><td>Jackson Laboratuvarı</td><td>5557</td><td>NOD. SCID IL2R gama nakavt türü en iyi türdür; 4-6 haftalık</td></tr><tr><td>1.5 ml mikrosantrifüj tüpleri, steril</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>05-408-129</td><td></td></tr><tr><td>15 ml vidalı tüpler, steril</td><td>BD Biosciences</td><td>352096</td><td></td></tr><tr><td>PAP kalemi</td><td>Yaşam Teknolojileri</td><td>8899</td><td></td></tr><tr><td>hemositometre</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>02-671-6</td><td></td></tr><tr><td>Nair epilasyon kremi</td><td>Walmart</td><td></td><td></td></tr><tr><td>anti-insan CD31 birincil antikoru</td><td>LifeSpan Biosciences</td><td>LS-B4737</td><td>çalışma çözümü 1: 50</td></tr><tr><td>anti-insan Düz Kas aktin CY3 birincil floresan antikoru</td><td>Sigma</td><td>C6198</td><td>çalışma çözeltisi 1: 300</td></tr><tr><td>keçi anti-tavşan ikincil antikorudur; 488/yeşil</td><td>ThermoFisher Scientific</td><td>A-11008</td><td>çalışma çözümü 1:250</td></tr><tr><td>Prolong Gold DAPI çözeltisi</td><td>Hücresidir Sinyalizasyon</td><td>8961S</td><td></td></tr><tr><td>mikroskop slaytları</td><td>VWR</td><td>48300-047</td><td></td></tr><tr><td>no. 1.5 kapak fişleri</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>12-544-D</td><td></td></tr><tr><td>sitrat tamponu 10x</td><td>Millipore</td><td>21545</td><td></td></tr><tr><td>ekstra ince cerrahi makas</td><td>Güzel Bilim Araçları</td><td>14084-08</td><td></td></tr><tr><td>Formalin (paraformaldehit)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>245-685</td><td></td></tr><tr><td>Doku kasetleri</td><td>Simport</td><td>M492-12</td><td></td></tr><tr><td>keçi serumu</td><td>Dako</td><td>X0907</td><td></td></tr></tbody></table>

fare matrix jel plug test kullanma İnsan endotel-pericyte etkileşim vivo Çalışmasında

In Vivo Study of Human Endothelial-Pericyte Interaction Using the Matrix Gel Plug Assay in Mouse

Anjiyogenez, mevcut damarlardan yeni kan damarlarının oluşturulduğu süreçtir. Yeni damar büyümesi, koordineli endotel hücre proliferasyonu, göçü ve tübüler yapılar oluşturmak için hizalamayı ve ardından duvar desteği sağlamak ve damar olgunlaşmasını kolaylaştırmak için perisitlerin işe alınmasını gerektirir. Mevcut in vitro hücre kültürü yaklaşımları, endotel hücrelerinin ve perisitlerin fonksiyonel damarlar üretmek için etkileşime girdiği karmaşık biyolojik ortamı tam olarak yeniden üretemez. Şiddetli kombine immün yetmezlik mutasyonu (SCID) fareleri kullanarak endotelyal-perisit etkileşimlerini ve fonksiyonel kan damarlarının oluşumunu incelemek için in vivo matris jel tıkaç testinin yeni bir uygulamasını sunuyoruz. Kısaca matriks jel, perisitli veya perisitsiz endotel hücreleri içeren bir çözelti ile karıştırılır ve ardından anestezi uygulanmış SCID farelerinin arkasına enjeksiyon yapılır. 14 gün sonra, matris jel tıkaçları çıkarılır, sabitlenir ve histolojik analiz için bölümlere ayrılır. Olgun damarların perisit kapsamının uzunluğu, sayısı, boyutu ve kapsamı (lümendeki kırmızı kan hücrelerinin varlığı ile tanımlanır) ticari istatistiksel platformlar kullanılarak deney grupları arasında ölçülebilir ve karşılaştırılabilir. Bir anjiyogenez testi olarak kullanılmasının ötesinde, bu matris jel tıkaç testi, genetik çalışmalar yapmak ve ilaç keşfi için bir platform olarak kullanılabilir. Sonuç olarak, bu protokol araştırmacıların endotelyal-perisit etkileşimlerinin incelenmesi ve bunların sistemik veya pulmoner anjiyogenez ile ilgisinin incelenmesi için mevcut in vitro testleri tamamlamalarına izin verecektir.

Matris jel fiş bölümlerinin Temsilcisi H &amp; E ve immunofluorescent boyama sadece fişler çoğunlukla içeren fişler ise kanda (sol Şekil 2 top, siyah oklar) ile perfüze olmayan bazı damarları EC ve perisitler hem perfüze birkaç görüntüler gösterilecek EC, Şekil 2&#39;de Bölümler gösterilmektedir CD31-pozitif EC hemen bitişiğinde pozitif SMA boyama ile kanıtlandığı gibi büyük çaplı ve tam perisit kapsama kaplar. Bu sonuçlar, perisitler oluşmakta olan kan ...

Biz matris jel fiş anjiyogenez testinin bir varyasyon kullanarak fare insan endotel-pericyte etkileşimleri incelemek için bir protokol mevcut.

Fare Matrix Jel Plug Test kullanma İnsan endotel-pericyte Etkileşim Vivo Çalışmasında

Angiogenesis is the process by which new blood vessels are formed from existing vessels. New vessel growth requires coordinated endothelial cell ...

Bu in-vivo matris jel analizinin genel amacı, endotel hücrelerin parazitlerle olan etkileşimini incelemektir. Bu matrigel analizi, araştırmacıların anjiyogenezin ana aşamalarını çalışmasına yardımcı olmak için tasarlanmıştır. Ayrıca, kan damarı oluşumundaki temel adımlardan sorumlu sinyal yolaklarının yanı sıra, disfonksiyonu vasküler bozukluklara ve anjiyogenezin diğer sapmalarına yol açabilen genlerin tanımlanmasına da olanak sağlayacaktır.Bu tekniğin temel avantajı, hem endotel hücrelerini hem de destek hücreleri olan perisitleri içeren in-vivo kan damarı oluşumunu incelememize olanak sağlamasıdır. Başlamak için, insan endotel ve parazit hücresi kültürlerini, 100 mm'lik plaklarda 10 mL uygun besiyeri ile büyütün. Hücreler %80 konfluensle ulaşana kadar besiyerini her iki ila üç günde bir değiştirin.Hücrelerle karıştırmak için matris jel çözeltisini hazırlamak amacıyla, bir matris jel stoğunu dört santigrat derecede gece boyunca çözdürün. Ardından, uzun süreli saklama için negatif-20 santigrat derecede veya iki haftaya kadar dört santigrat derecede saklanmak üzere 1,5 mililitrelik alikotlar hazırlayın. Her bir deneysel tapa için 200 mikrolitre matris jel gerekecektir.Böylece, stoktaki tek bir tüp %25 fazlalıkla altı tıpa için yeterli miktar sağlayabilir. Çözünmüş 100x beta-FGF stokundan 15 µL ekleyerek kullanılması gereken her bir alikotu hazırlayın. beta-FGF'yi pipetleme yoluyla çözeltiyle karıştırın, ardından hücreleri eklemeden önce en az 30 dakika boyunca buz üzerinde inkübe edin.Bu aşamada, enjeksiyonlar için bazı 28G 1cc insülin şırıngalarını soğutun. Hücreleri kültür plaklarından toplamak için medyumu uzaklaştırın ve hücreleri bir kez PBS ile yıkayın. PBS'yi uzaklaştırdıktan sonra, bir mililitre tripsin çözeltisi ekleyin ve plakları bir dakika boyunca inkübatöre geri koyun.Ardından, hücreleri ayırmak için plakların üzerine iki mililitre kültür medyumu pipetleyin ve medyumu 15 mililitrelik bir tüpe toplayın. Şimdi, toplanan hücrelerin konsantrasyonunu bir hemositometre kullanarak kontrol edin. Daha sonra, 15 mililitrelik tüplerde hücre alikotları hazırlayın.Deney grubu için burada bir milyon endotel hücre ve 200.000 parazitin kombinasyonu kullanılır. Ardından, hücre alikotlarını 400g'de beş dakika boyunca santrifüjleyin. Daha sonra, hesaplanan matris jel hacmini hücre peletine ekleyin ve hava kabarcıkları enjekte edilemeyeceği için köpük oluşmayacak şekilde nazik pipetleme ile karıştırın.Şimdi, fareler enjeksiyona hazır olana kadar preparatları buz üzerinde tutun. Bir fareyi izofluran ile anestezi ettikten ve anestezi durumunu ayak parmağı sıkıştırma testiyle onayladıktan sonra, fareyi izofluran sağlayan yeniden solumasız sisteme bağlayın ve ventral tarafı aşağı gelecek şekilde ısıtma pedine yerleştirin. Şimdi her iki lateral arka bölgeden yaklaşık bir santimetrekarelik tüyü temizleyin.Ardından, açığa çıkan cildi %70 alkol kullanarak temizleyin. Sonrasında, dört tıpa için yeterli olan bir mililitre hazırlanmış hücre solüsyonunu soğutulmuş bir şırıngaya yükleyin. Enjeksiyon yapmak için, deri altı boşluğunu belirlemek amacıyla sırt derisini kaldırın.Ardından 200 µL'yi göğüs kafesinin arkasındaki deri altı boşluğuna yavaşça ve eşit şekilde enjekte edin ve sızıntıyı önlemek için iğneyi yavaşça geri çekin. Enjeksiyondan sonra uygulama bölgesinde bir şişlik oluşacaktır. Bölgeyi alkolle silin, ardından şişliğin daha sonra bulunabilmesi için etrafını kalıcı bir markörle işaretleyin.Ardından, enjeksiyon işlemini farenin diğer tarafında tekrarlayın. Tüm hücreleri üç dakika içinde enjekte ettiğinizden emin olun, aksi takdirde hücreler şırıngaya yapışmaya başlayacaktır. Matris jel tıkacının deri ve kas tabakaları arasında oluşmasını, böylece tıkacın iyi bir şekil korumasını ve yayılmamasını sağlamak için enjeksiyon adımının düzgün yapılması kritiktir.Bir sonraki fareye enjeksiyon yapmadan önce, matriksin jelleşmesi için enjeksiyon yapılan farenin bir dakika boyunca ısıtma pedinde kalmasını sağlayın. Ötanazi sonrası, fareyi operasyon tablasına yerleştirin. Enjeksiyon bölgesinde yeniden uzamış olan tüyleri temizledikten sonra, tıkaç konumunu belirleyen işaret çizgilerini bulun.Ardından, ince cerrahi makaslar kullanarak, tapanın işaretlenmiş sınırı boyunca, cilde dik ve altındaki kas tabakasına kadar uzanan bir insizyon yapın. İşaretli sınırın çevresini dikkatlice kesin. Daha sonra, tapanın deri ve kas tabakaları arasında sıkışmış halde kaldığından emin olarak tapayı çıkarın.Kanı temizlemek için tıkacı hemen PBS içeren küçük bir beherde durulayın. Ardından, tıkacın tamamını 25 mL %4 paraformaldehit içeren 50 mililitrelik bir tüpe yerleştirin. Herhangi bir ajitasyon uygulamadan, oda sıcaklığında 24 saat boyunca fiksasyona bırakın.Ertesi gün, tıkaçları 24 saat boyunca 25 milliliters 70% etanol içine aktarın. Ardından, parafin gömme işlemine geçin. Sadece endotel hücreler içeren tıkaç kesitleri, bazı damarların in-vivo ortamda 14 gün sonra konakçının kanı ile perfüze olmadığını göstermektedir.Buna karşılık, hem endotel hücreleri hem de parazitler içeren tıkaçlar, in-vivo 14 gün sonra birçok perfüze damar sergilemektedir. Bu tıkaçlarda, yeşil renkte görülen CD31 pozitif endotel hücrelerinin hemen yanında, kırmızı renkte görülen düz kas aktin boyaması pozitif hücreler mevcuttur. Bu nedenle, parazitler yeni kan damarı oluşumunda önemli bir rol oynuyor olabilir.Bu videoyu izledikten sonra, çok sayıda hücre tipinde kullanılan kan damarı oluşumunu incelemek için bu güçlü in-vivo tekniğinin nasıl uygulanacağı konusunda iyi bir anlayışa sahip olmalısınız. Bu teknik, araştırmacıların fare modellerinde vasküler biyolojinin çeşitli konularını keşfetmelerinin önünü açacaktır. Bu prosedürün ardından, gen ekspresyonundaki değişiklikler ve proteomik gibi ek soruları yanıtlamak için kantitatif PCR ve Western immunoblotting gibi diğer yöntemler de uygulanabilir.Bu güçlü teknik, araştırmacının kan damarı oluşumu sırasında endotel hücrelerinin ve parazitlerin in-vivo olarak nasıl etkileşime girdiğini incelemesine olanak tanıyacaktır; bu, androjenezin temel bir adımıdır. Bu güçlü teknik aynı zamanda araştırmacının, diğerlerinin yanı sıra pulmoner hipertansiyon gibi vasküler hastalıkların anlaşılmasıyla ilgili olan diğer hücre-hücre etkileşimlerini incelemesine de olanak sağlayacaktır.

in-vivo-study-human-endothelial-pericyte-interaction-using-matrix-gel

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

Burada, biz insan kordon kanı endotel koloni oluşturan hücrelerin (ECFCs -) ve kemik iliğinden elde edilen bağışık yetmezliği olan farelere subkutan kollajen / fibronektin jel gömülü mezenkimal kök hücreler (MKH), teslim etmek için bir metodoloji tarif Bu hücre / jel kombinasyonu, fare damarsal ile bağlayan bir insan bir damar ağı oluşturur.

Bağışık yetmezliği olan farelere Biyomühendislik İnsan Mikrovasküler Ağları

Bu videoda, intraperitoneal olarak lipopolisakkarit enjekte edilen bir fare modelinin mezenterial damarlarındaki kan hücresi-endotel etkileşimlerinin gerçek zamanlı görselleştirmesini gösteriyoruz.

Bir Enflamasyon Fare Modelinde Kan Hücresi-Endotel Etkileşimlerini Analiz Etmek için İntravital Mikroskopi

An<em&gt; In vivo</emKan Gemi Geçirgenlik Test&gt; Test

Endotelyal endotel / glycocalyx yüzey tabakası ideal intravital mikroskobu kullanılarak incelenmiştir. Intravital mikroskop teknik gibi akciğer gibi hareketli bir organ zordur. Biz eş zamanlı aydınlık ve floresan mikroskop serbestçe-hareket eden endotel yüzey tabakasının kalınlığını belirlemede nasıl kullanılabileceğini...

Fare Pulmoner Endotelyal Yüzey Katman in vivo ölçümü olarak

Burada vasküler inflamasyon ve canlı farelerde trombüs oluşumu sırasında aktive endotel üzerindeki heterotipik trombosit-nötrofil etkileşimleri görselleştirmek için floresan intravital mikroskobu deneysel bir tekniktir rapor. Bu mikroskobik teknoloji vasküler hastalığın moleküler mekanizmasını incelemek ve patofizyolojik durumlardaki farmakolojik ajanları test için değerli olacaktır.

Canlı Fare Damar İltihabı ve trombüs oluşumu sırasında Activated Endotel üzerinde heterotypic Trombosit nötrofil Etkileşimleri Gerçek zamanlı Görüntüleme

Ultrason ve endomikroskopi olmak üzere iki tamamlayıcı görüntüleme yöntemi kullanarak kanser hücreleri tarafından salgılanan bir faktör havuzunun anjiyojenik potansiyelini göstermek için bir matrigel tıkaç testi tarif ediyoruz. Hücre dışı bir matriks (ECM) taklidi jeli olan matrigel, konağı (fare) şartlandırılmış ortama (CM) salgılanan anjiyojenik faktörlerle tanıştırmak için kullanılır.

Hızlı büyüyen Tümör üreten hücreleri tarafından salgılanan faktörler tarafından işe alınmış İzleme İşlevsellik ve vaskülatürüne morfolojisi

Bu el yazması, kontrollü bir ortamda endotel hücre tüpü oluşumunu kullanarak belirli bir bileşiğin veya durumun anjiyogenez üzerindeki etkilerini ölçmek için bir tüp oluşturma testini açıklar.

Stratejik Endotel Hücre Tüp Oluşumu Testi: Azaltılmış Ekstrasellüler Matrix Ekstrasellüler Matrix ve Büyüme Faktörü Karşılaştırılması

Bir roman vitro boncuk tahlil bu protokolü sunar daha uygun modelleri perisitlerden dahil ederek angiogenez çimlenme vivo içinde süreci. Bu değişiklik daha sadakatle heterotypic hücresel etkileşimlerin endotel hücreleri ve anjiogenezi için kritik olan duvar hücreler arasındaki özetlemek boncuk tahlil sağlar.

Perisitlerden tahlil filizlenen bir endotel hücre boncuk birleşmeyle

Bu yöntemin amacı sonraki hücresel tahliller için doğal bir iskele olarak fibroblast türetilmiş 3D matris elde etmektir. Fibroblastlar önceden işlenmiş bir kültür plakası içinde tohumlanır ve matris üretimi için askorbik asit ile uyarılır. Matrisler hücreden arındırılır ve kültürle ilgili hücrelere (örn. endotel hücreleri) bloke edilir.

Endotel Tüp Oluşumu Namına Uygulanan Fibroblast Türetilmiş 3D Matris Sistemi

Bu tahlil, filizlenen anjiyogenezi in vitro olarak kontrol eden biyolojik süreçleri analiz etmek için 3D-kollajen jel içinde kültürlenmiş embriyoid cisimlere farklılaştırılmış fare embriyonik kök hücrelerini kullanır. Bu teknik, ilaçları test etmek, hastalıkları modellemek ve embriyonik olarak ölümcül olan delesyonlar bağlamında spesifik genleri incelemek için uygulanabilir.

In Vitro Vasküler Hastalık Modellemesi ve İlaç Testi için Fare Embriyonik Kök Hücreleri Kullanılarak Anjiyogenezin Üç Boyutlu Filizlenme Testi

Burada sunulan yöntem, reaktiflerin anjiyogenez veya vasküler geçirgenlik üzerindeki etkisini in vivo boyamadan değerlendirebilir. Yöntem, neo-damarları veya vasküler sızıntıyı görselleştirmek için kuyruk damarı yoluyla dekstran-FITC enjeksiyonunu kullanır.

Anjiyogenez Çalışmaları için Modifiye In Vivo Matrix Jel Plug Testi

Öğrenin, fare matriks jel plug testi ile insan endotel-perisit etkileşimlerini in vivo ortamda nasıl çalışacağınızı. Bu yöntem, anjiyogenez ve damarsal bozukluklara yönelik sinyal yollarını araştırmada kullanılır.

Fare Matrix Jel Plug Test kullanma İnsan endotel-pericyte Etkileşim Vivo Çalışmasında

Daha fazla video keşfet