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Thermostabilisation, Expression, purification et cristallisation du Serotonin Human Transporter Bound to S -citalopram

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Thermostabilization, Expression, Purification, and Crystallization of the Human Serotonin Transporter Bound to S-citalopram

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Thermostabilisation, Expression, purification et cristallisation du Serotonin Human Transporter Bound to S -citalopram

DOI:

10.3791/54792-v

•

12:21 min

•

November 27, 2016

•

Jonathan A. Coleman, Evan M. Green, Eric Gouaux³

¹Vollum Institute,Oregon Health & Science University, ²Graduate Group in Biophysics,University of California, San Francisco, ³Howard Hughes Medical Institute,Oregon Health & Science University

Chapitres

00:05Titre
00:47Transfection of Adherent HEK293S GnTI-cells for Thermostability Screen
02:24Scintillation Proximity-based Thermostability Screen with Citalopram
04:18Expression of the Human Serotonin Transporter in HEK293S GnTI-cells
05:24Affinity-purification of the Serotonin Transporter for Immunization and Crystallization
07:12Formation of Transporter-antibody Complexes and Separation by Size-exclusion Chromatography
08:21Crystallization of Transporter-antibody Complexes by Hanging Drop
10:01Results: Thermostabilization and Crystallization of the Serotonin Transporter in an Antidepressant-bound State
11:25Conclusion

Summary

Traduction automatique

Ce manuscrit décrit comment dépister les thermostabilizing mutations, purifier le transporteur de la sérotonine humaine, générer des anticorps de haute affinité, et cristalliser le complexe transporteur-anticorps sérotonine lié à l'antidépresseur drogue S -citalopram. Ce protocole peut être adapté à l'étude d'autres transporteurs membranaires complexes, des récepteurs et des canaux.

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