Name: Non-invaziv Aktive Edilebilir Floresan Görüntüleme Ajanını Kullanan İnflamatuvar MMP Aktivitesinin Flüoresan Optik Görüntülemesi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2017-05-08T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 min 46 s
Description: Keşfedin, aktive edilebilir floresan optik görüntüleme probu kullanarak inflamatuvar hastalıklarda matris metaloproteinaz (MMP) aktivitesini canlı modellerde görselleştirme yöntemini. Bu teknik, iltihaplanma mekanizmalarını hızlı ve etkili şekilde incelemek için idealdir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Biz mükemmel teknik destek için Daniel Bukala Natalie Altmeyer ve Funda Cay teşekkür ederim. Biz taslağın düzenlenmesi için Jonathan Cotton Greg Bowden ve Paul Soubiran teşekkür ederim. Bu çalışma CRC 156 (proje C3) üzerinden Werner Siemens-Vakfı ve Eberhard Karls Üniversitesi Tübingen ( &#39;&#39; Promotionskolleg &#39;&#39;) Tıp Fakültesi tarafından ve DFG tarafından desteklendi.

Bu makalede açıklanan tüm prosedürler, laboratuar hayvanlarının bakımı ve kullanımı ile ilgili uluslararası standartlara ve kurallara uymuş ve Almanya&#39;nın Tuebingen Ülke Komisyonu&#39;nun Hayvan Refah ve Etik Komitesi tarafından onaylanmıştır. 8 - 12 haftalık BALB / c ve C57BL / 6 fareleri, 12 saatlik bir süreyle 12 saat süreyle tutuldu: 12 saatlik ışık: karanlık döngüde, 2-5 gruplar halinde 22 ± 1 ° C&#39;de IVC&#39;ler ve standart çevre koşulları altında su ve Gıda erişimi ad libitum . 1. Malzeme Hazırlama <ol><li> Enjeksiyondan önce doğrudan ilgili veri sayfasına göre OI boyasını yakın kızılötesi floresans görüntüsü için inceltin. MMP&#39;leri in vivo ölçmek için aktive olabilen OI boyası (680 nm&#39;de uyarımlı ticari prob), 1.5 mL 1x PBS&#39;de 20 nmol konsantrasyonda kullanıma hazırdır. Çözümü kullanmadan önce hafifçe çalkalayın veya vorteksleyin. OI boyası ışığa karşı korunduğunda 2-8 ° C&#39;de 6 aya kadar depolanabilir. </li&gt; <li> İntravenöz ( İV ) enjeksiyonlar için bir venöz kateteri hazırlayın. % 0.9 salin solüsyonu (50 mL&#39;de 10 enjeksiyon ünitesi içeren) ve 30 gauge iğne ile polietilen katetere bağlanmış 20 U (0.5 mL) insülin şırınga kullanın. OI boya fare başına önerilen 2 nmol dozunu enjekte edin. </li></ol> 2. Romatoid Artritin İndüksiyonu ve Kronik Temas Hipersensitivitesi Reaksiyonu <ol><li> Romatoid artrit: <ol><li> RA uyarmak için 1x PBS (200 μL) ile glikoz-6-fosfat izomeraz (GPI) 1: 1&#39;e karşı antikorlar (AB) içeren serum 100 μL&#39;yi (K / BxN farelerinden elde edilen 10 ) seyreltin. Seyreltilmiş serumu -80 ° C&#39;de saklayın. RA indüksiyonu için ayrıntılı prosedürler Monach ve ark. Tarafından anlatılmıştır . 8 . </li><li> RA indüklemek için, her kuyruğunu kuyruğuyla hafifçe kaldırın ve t 0 gününde 200 μL seyreltilmiş serum intraperitoneal ( ip ) enjekte edinDeniyor. Enjeksiyondan sonra fareyi doğrudan kafesin içine geri koyun. </li><li> İsteğe bağlı olarak, AB enjeksiyonlarından önce ayak bileği çaplarını ölçün ve bir &quot;artritik skor&quot; ( Şekil 1A ) tanımlayın. Mekanik bir ölçüm cihazı (mikrometre) kullanarak GPI serumundan 6. güne kadar günlük ayak bileği şişlik ölçümüne devam edin. </li><li> Aktifleştirilebilir OI boyasını enjekte edin (adım 1.1 - 1.2), in vivo MMP aktivitesi iv&#39;yi RA farelerinin kuyruk damarına ölçün GPI-serum enjeksiyonundan sonra 5. günde ve kontrol farelerinin kuyruk venine uygulandı. Kuyruk damarı enjeksiyonundan 24 saat sonra optik görüntüleme deneyleri uygulayın. </li></ol></li><li> Aşırı duyarlılık reaksiyonuyla temas: <ol><li> C57BL / 6 farelerinin sensitizasyonu için, 4: 1 aseton / yağ karışımı içinde çözülmüş% 5 TNCB çözeltisi hazırlayın. </li><li> % 100 oksijen (1.5 L / dk) buharlaştırılmış% 1.5 izofluran kullanarak C57BL / 6 farelerde anestezi uygulayın. Fareler uyuşturulduktan sonra, kendiliğinden çılgınca yerleştirin<html> Burun konisi (hacimce% 1.5 izofluran tüpüne bağlı kesilmiş bir 5 mL polietilen şırınga) ve anestezi korumalıdır. Anestezi uygulanırken göz kuruluğunu önlemek için anestezi uygulanmış hayvanlara veteriner merhemi uygulayın. </li><li> Küçük bir hayvan tüy düzeltici kullanarak karnınızı dikkatle tıraş edin (2 x 2 cm). Cildin yaralanmasından kaçının; zira bu, hayvandaki spesifik olmayan flüoresan sinyallerine neden olabilir ve çalışmanın sonuçlarını etkileyebilir. </li><li> Hayvanı hassaslaştırmak için 100 uL&#39;lik bir pipet kullanarak traşlı karın bölgesine yavaş yavaş 80 μL% 5 TNCB solüsyonu uygulayın. Fare, korneanın hasar görmesini önlemek ve iyileşme safhasında düşük vücut ısısından kaçınmak için fare gözlerinin yataklarla temas etmemesine özen göstererek nazikçe kafesin içine geri koyun. </li><li> Duyarlılığın altıncı gününde% 1 TNCB solüsyonu (9: 1 aseton / yağ karışımı içinde çözülmüş) hazırlayın ve akut ve kronik CHSR&#39;yi elde etmek için bir pipet yardımıyla sağ kulakta 20 mcL uygulayın.&quot;&gt; 1 <ol><li> 100 μL&#39;lik bir pipet kullanarak 20 μL% 1 TNCB çözeltisiyle sağ kulağın her iki tarafındaki 1. meydan okumayla başlayın ve CHR&#39;yi ortaya çıkarmak için her saniye ikinci günde beş kez tekrarlayın (hassasiyetten sonra 15 gün sonra) . Kulak kalınlığını her gün bir mikrometre ölçüm cihazı kullanarak ölçün. </li></ol></li><li> Meydan okumadan 12 saat sonra CHR farelerinde in vivo olarak MMP aktivitesini ölçmek için aktive olan OI boyasını (680 nm&#39;de uyarımlı ticari bir prob) enjekte edin (adım 1.1-1.2). 24 saat post kuyruk damarı enjeksiyonu ( iv ) ile optik görüntüleme deneyleri yapın. </li></ol></li></ol> 3. Optik Görüntüleme İçin Hayvan Hazırlığı <ol><li> Kullanılmış OI ajanlarının flüoresan sinyaliyle otomatik flüoresansın (yaklaşık 700 nm) parazitlenmesini önlemek için fare yemini (görüntülemeden en az 3 gün önce) düşük veya floresan olmayan çaylara ( örn. , Manganez içermez) çevirin. </li><li> Hayvanı yerleştirinBir anestezi kutusuna yerleştirin ve oksijen ile buharlaştırılmış hacimce% 1.5 izofluran kullanarak (oksijen hava ile değiştirilebilir, ancak bir denemede standart haline getirilmesi gerekir) anestezi altına alın. </li><li> Fareye görünür şekilde anestezi uygulandığında, kendiliğinden üretilen burun konisine yerleştirin (hacimce% 1.5 izofluran tüpüne bağlı, kesilmiş bir 5 mL&#39;lik polietilen şırınga ile oluşturun) ve anestezi uygulayın. </li><li> Hayvanı, küçük bir hayvan tüy düzeltici kullanarak hedef bölgede (2 cm x 2 cm) dikkatle tıraş edin. Cildin yaralanmasından kaçının; zira bu, hayvandaki spesifik olmayan flüoresan sinyallerine neden olabilir ve çalışmanın sonuçlarını etkileyebilir. NOT: Saçlar, ilgilenilen bölgeye (ROI) bağlı olarak, OI boyunca flüoresan sinyalini absorbe edebilir (fare suşuna bağlıdır, daha fazla veya daha az emilim gözlenir). </li><li> İV enjeksiyonu için, vazodilatasyon başlatmak için fare kuyrukunu ılık suya yerleştirin, alkolle enjeksiyon yerinde deriyi nazikçe temizleyin ve kateterin üzerine yerleştirilmesine başlayınkuyruğunun uzak bir site. kuyruk damarına 20 ° &#39;lik bir açı ile, iğnenin kenar &quot;kesme&quot; ve şırınga yeniden süspansiyon haline getirerek kateterin doğru yerleştirilmesi test etmek yerleştirin. </li><li> Kateter doğru yerleştirilir, şırınga yerine ve Ol probu (2 nmol) enjekte edilir. Enjeksiyondan sonra, şırınga yerine ve% 0.9 salin çözeltisi polietilen borunun tam olarak net ölü hacmi 25 uL enjekte edilir. Not: kullanılan OI boyanın dokusu yarılanma ömrü süresi, in vivo olarak, MMP aktivitesinin ölçülmesi için (680 nm&#39;de eksıtasyonla ticari bir prob) 72 saattir. Tam bir açıklık sağlamak için, boya yeniden enjeksiyon önceki enjeksiyondan sonra daha önceki 7 günden önerilmez. </li></ol> 4. Optik Görüntüleme <ol><li> görüş alanı (FOV) merkezinde OI-tarayıcının siyah kutu içinde bir siyah plastik ya da kağıt tabaka yerleştirin. </li><li> Bir ölçüm protokolünü kurmak ve sağ dalga boyu tercih (eksitasyon: 680 ± 10 nm, eGörev: 700 ± 10 nm) ve görüntüleme parametreleri. NOT: Bazı OI sistemlerinde, çeşitli görüntüleme boyalarının kurulumu önceden tanımlanmıştır. </li><li> Floresan görüntüleme için doğru protokolü seçmek için görüntüleme yazılımını açın (üretici tarafından sağlanır) ve sistemi başlatın. Çoğu CCD kameranın çalışma sıcaklığına soğuması gerekir ve bu işlem 10 dakika sürebilir. Güvenilir sonuçlar için, sistem hazır oluncaya kadar bekleyin. </li><li> İn vivo görüntüleme sistemi edinme kontrol panelinin açılmasını göz önünde bulundurun ve seçilen her filtre çifti dizideki bir görüntüyü temsil edecektir. Bu durumda, sırasıyla 680 ± 10 nm ve 700 ± 10 nm&#39;lik bir uyarılma ve emisyon dalga boyuna sahip olan ticari boya için filtre çiftleri ile bir görüntü elde edin ve ölçümü başlatın (&quot;Alınan sıralama&quot; tuşuna basın). Daha ayrıntılı talimatlar için üreticinin el kitabına bakın. </li><li> Görüntüleri uygun şekilde etiketleyin ve bilgileri &quot;Görüntü Düzenle&quot; ye kaydedin.Labels &quot;penceresi açılır ve&quot; Acquire sequence &quot;i izleyecektir. </li><li> OI boya enjeksiyonundan önce her bir hayvanın temel taramasını yapın veya arka plan sinyalini ayırt etmek için naif kontrol hayvanları kullanın. </li><li> Saat sonra OI boya kuyruk damar enjeksiyonu, hayvanlar OO sisteminde en yüksek sinyali ölçmek için bir pozisyonda, FOV ortasına yerleştirin ve ölçümleri başlatmak. NOT: Önemli: Hipotermi, görüntüleme maddelerinin dağılımını önemli ölçüde etkileyebilir. Hayvanların hipotermiden kaçınmak için sahnenin 37 ° C&#39;ye kadar ısıtıldığından emin olun. Görüntüleme, 1-5 fareden oluşan gruplar halinde eşzamanlı olarak gerçekleştirilebilir. Aynı anda ölçülecek hayvan sayısına bağlı olarak FOV boyutunu seçin. Her fare görünür olup olmadığını kontrol etmek için parlak bir alan resmi alabilirsin. </li></ol> 5. Veri Analizi NOT: Aşağıdaki görüntü yazılımını kullanarak veri analizi yapınÜreticinin protokolü. <ol><li> RA ölçümleri için, Şekil 2&#39;de gösterildiği gibi foton emisyonunun kalibre edilmiş birimi kullanılırken, kronik CHSR yüzde olarak (etkinlik) sinyal yoğunluğu olarak resmedilmiştir. </li><li> ROI&#39;leri el ile çizmek için alet plakasını kullanın. RA görüntülerinin analizi için, her hayvanın tüm ayak bilekleri ve pençeleri arasında en yüksek sinyalin etrafına yerleştirilmiş standart bir daire kullanın. CHSR&#39;yi analiz etmek için ROI&#39;leri parlak alan görüntüsüne göre sağ ve sol kulak çevresine yerleştirin. </li><li> Belirli çizilen ROI&#39;de foton emisyonunu veya sinyal yoğunluğu değerlerini ölçmek için &quot;ölçme&quot; ye basın. Sistem betimsel istatistiksel analiz için çizilen ROI&#39;de değerler sağlayacaktır. </li></ol>

<ol><li>Veale, D. J., Ritchlin, C., FitzGerald, O. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunopathology+of+psoriasis+and+psoriatic+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+Rheum+Dis%22%5BJournal%5D)">Immunopathology of psoriasis and psoriatic arthritis.</a> Ann Rheum Dis. 64, 26(2005).</li>
<li>Harris, E. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rheumatoid+arthritis.+Pathophysiology+and+implications+for+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22N+Engl+J+Med%22%5BJournal%5D)">Rheumatoid arthritis. Pathophysiology and implications for therapy.</a> N Engl J Med. 322 (18), 1277-1289 (1990).</li>
<li>Lee, D. M., Weinblatt, M. E. <a target="_blank" href="https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/11567728">Rheumatoid arthritis.</a> Lancet. 358 (9285), 903-911 (2001).</li>
<li>Firestein, G. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunologic+mechanisms+in+the+pathogenesis+of+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Rheumatol%22%5BJournal%5D)">Immunologic mechanisms in the pathogenesis of rheumatoid arthritis.</a> J Clin Rheumatol. 11, S39-S44 (2005).</li>
<li>Pap, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+expression+pattern+of+membrane-type+matrix+metalloproteinases+in+rheumatoid+arthritis%5BTitle%5D)+AND+%22Arthritis+Rheum%22%5BJournal%5D)">Differential expression pattern of membrane-type matrix metalloproteinases in rheumatoid arthritis.</a> Arthritis Rheum. 43 (6), 1226-1232 (2000).</li>
<li>Firestein, G. S., Paine, M. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stromelysin+and+tissue+inhibitor+of+metalloproteinases+gene+expression+in+rheumatoid+arthritis+synovium%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Pathol%22%5BJournal%5D)">Stromelysin and tissue inhibitor of metalloproteinases gene expression in rheumatoid arthritis synovium.</a> Am J Pathol. 140 (6), 1309-1314 (1992).</li>
<li>Schwenck, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+imaging+of+matrix+metalloproteinase+activity+detects+acute+and+chronic+contact+hypersensitivity+reactions+and+enables+monitoring+of+the+antiinflammatory+effects+of+N-acetylcysteine%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">In vivo optical imaging of matrix metalloproteinase activity detects acute and chronic contact hypersensitivity reactions and enables monitoring of the antiinflammatory effects of N-acetylcysteine.</a> Mol Imaging. 13, (2014).</li>
<li>Monach, P. A., Mathis, D., Benoist, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+K%2FBxN+arthritis+model%5BTitle%5D)+AND+%22Curr+Protoc+Immunol%22%5BJournal%5D)">The K/BxN arthritis model.</a> Curr Protoc Immunol. 15, 22(2008).</li>
<li>Zelmer, A., Ward, T. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Noninvasive+fluorescence+imaging+of+small+animals%5BTitle%5D)+AND+%22J+Microsc%22%5BJournal%5D)">Noninvasive fluorescence imaging of small animals.</a> J Microsc. 252 (1), 8-15 (2013).</li>
<li>Kouskoff, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Organ-specific+disease+provoked+by+systemic+autoimmunity%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Organ-specific disease provoked by systemic autoimmunity.</a> Cell. 87 (5), 811-822 (1996).</li>
<li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+cell+proliferation+enables+the+detection+of+the+extent+of+experimental+rheumatoid+arthritis+by+3%27-deoxy-3%27-18f-fluorothymidine+and+small-animal+PET%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of cell proliferation enables the detection of the extent of experimental rheumatoid arthritis by 3'-deoxy-3'-18f-fluorothymidine and small-animal PET.</a> J Nucl Med. 54 (1), 151-158 (2013).</li>
<li>Schwenck, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Fluorescence+and+Cerenkov+luminescence+imaging.+Applications+in+small+animal+research%5BTitle%5D)+AND+%22Nuklearmedizin%22%5BJournal%5D)">Fluorescence and Cerenkov luminescence imaging. Applications in small animal research.</a> Nuklearmedizin. 55 (2), 63-70 (2016).</li>
<li>Mahling, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Comparative+pO2+Probe+and+%5B18F%5D-Fluoro-Azomycinarabino-Furanoside+%28%5B18F%5DFAZA%29+PET+Study+Reveals+Anesthesia-Induced+Impairment+of+Oxygenation+and+Perfusion+in+Tumor+and+Muscle%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+One%22%5BJournal%5D)">A Comparative pO2 Probe and [18F]-Fluoro-Azomycinarabino-Furanoside ([18F]FAZA) PET Study Reveals Anesthesia-Induced Impairment of Oxygenation and Perfusion in Tumor and Muscle.</a> PLoS One. 10 (4), 0124665(2015).</li>
<li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxygen+breathing+affects+3%27-deoxy-3%27-18F-fluorothymidine+uptake+in+mouse+models+of+arthritis+and+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Oxygen breathing affects 3'-deoxy-3'-18F-fluorothymidine uptake in mouse models of arthritis and cancer.</a> J Nucl Med. 53 (5), 823-830 (2012).</li>
<li>Fuchs, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+anesthetics+on+3%27-%5B18F%5Dfluoro-3%27-deoxythymidine+%28%5B18F%5DFLT%29+uptake+in+animal+models+of+cancer+and+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Impact of anesthetics on 3'-[18F]fluoro-3'-deoxythymidine ([18F]FLT) uptake in animal models of cancer and inflammation.</a> Mol Imaging. 12 (5), 277-287 (2013).</li>
<li>Liu, N., Shang, J., Tian, F., Nishi, H., Abe, K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+imaging+for+evaluating+the+efficacy+of+edaravone+after+transient+cerebral+ischemia+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">In vivo optical imaging for evaluating the efficacy of edaravone after transient cerebral ischemia in mice.</a> Brain Res. 1397, 66-75 (2011).</li>
<li>Sheth, R. A., Maricevich, M., Mahmood, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+optical+molecular+imaging+of+matrix+metalloproteinase+activity+in+abdominal+aortic+aneurysms+correlates+with+treatment+effects+on+growth+rate%5BTitle%5D)+AND+%22Atherosclerosis%22%5BJournal%5D)">In vivo optical molecular imaging of matrix metalloproteinase activity in abdominal aortic aneurysms correlates with treatment effects on growth rate.</a> Atherosclerosis. 212 (1), 181-187 (2010).</li>
<li>Chen, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Near-infrared+fluorescent+imaging+of+matrix+metalloproteinase+activity+after+myocardial+infarction%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Near-infrared fluorescent imaging of matrix metalloproteinase activity after myocardial infarction.</a> Circulation. 111 (14), 1800-1805 (2005).</li>
<li>Wallis de Vries, B. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Images+in+cardiovascular+medicine.+Multispectral+near-infrared+fluorescence+molecular+imaging+of+matrix+metalloproteinases+in+a+human+carotid+plaque+using+a+matrix-degrading+metalloproteinase-sensitive+activatable+fluorescent+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation%22%5BJournal%5D)">Images in cardiovascular medicine. Multispectral near-infrared fluorescence molecular imaging of matrix metalloproteinases in a human carotid plaque using a matrix-degrading metalloproteinase-sensitive activatable fluorescent probe.</a> Circulation. 119 (20), e534-e536 (2009).</li>
<li>Weissleder, R., Tung, C. H., Mahmood, U., Bogdanov, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+imaging+of+tumors+with+protease-activated+near-infrared+fluorescent+probes%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">In vivo imaging of tumors with protease-activated near-infrared fluorescent probes.</a> Nat Biotechnol. 17 (4), 375-378 (1999).</li>
<li>Cortez-Retamozo, V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Real-time+assessment+of+inflammation+and+treatment+response+in+a+mouse+model+of+allergic+airway+inflammation%5BTitle%5D)+AND+%22J+Clin+Invest%22%5BJournal%5D)">Real-time assessment of inflammation and treatment response in a mouse model of allergic airway inflammation.</a> J Clin Invest. 118 (12), 4058-4066 (2008).</li>
<li>McIntyre, J. O., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+of+a+novel+fluorogenic+proteolytic+beacon+for+in+vivo+detection+and+imaging+of+tumour-associated+matrix+metalloproteinase-7+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Biochem+J%22%5BJournal%5D)">Development of a novel fluorogenic proteolytic beacon for in vivo detection and imaging of tumour-associated matrix metalloproteinase-7 activity.</a> Biochem J. 377, 617-628 (2004).</li>
<li>Scherer, R. L., VanSaun, M. N., McIntyre, J. O., Matrisian, L. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Optical+imaging+of+matrix+metalloproteinase-7+activity+in+vivo+using+a+proteolytic+nanobeacon%29%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Optical imaging of matrix metalloproteinase-7 activity in vivo using a proteolytic nanobeacon).</a> Mol Imaging. 7 (3), 118-131 (2008).</li>
<li>Olson, E. S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+characterization+of+activatable+cell+penetrating+peptides+for+targeting+protease+activity+in+cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Integr+Biol+%28Camb%22%5BJournal%5D)">In vivo characterization of activatable cell penetrating peptides for targeting protease activity in cancer.</a> Integr Biol (Camb. 1 (5-6), 382-393 (2009).</li>
<li>Duijnhoven, S. M., Robillard, M. S., Nicolay, K., Grull, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tumor+targeting+of+MMP-2%2F9+activatable+cell-penetrating+imaging+probes+is+caused+by+tumor-independent+activation%29%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Tumor targeting of MMP-2/9 activatable cell-penetrating imaging probes is caused by tumor-independent activation).</a> J Nucl Med. 52 (2), 279-286 (2011).</li>
<li>Schafers, M., Schober, O., Hermann, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Matrix-metalloproteinases+as+imaging+targets+for+inflammatory+activity+in+atherosclerotic+plaques%5BTitle%5D)+AND+%22J+Nucl+Med%22%5BJournal%5D)">Matrix-metalloproteinases as imaging targets for inflammatory activity in atherosclerotic plaques.</a> J Nucl Med. 51 (5), 663-666 (2010).</li>
<li>Wagner, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+18F-labelled+derivative+of+the+MMP+inhibitor+CGS+27023A+for+PET%3A+radiosynthesis+and+initial+small-animal+PET+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Appl+Radiat+Isot%22%5BJournal%5D)">A new 18F-labelled derivative of the MMP inhibitor CGS 27023A for PET: radiosynthesis and initial small-animal PET studies.</a> Appl Radiat Isot. 67 (4), 606-610 (2009).</li>
<li>Waschkau, B., Faust, A., Schafers, M., Bremer, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Performance+of+a+new+fluorescence-labeled+MMP+inhibitor+to+image+tumor+MMP+activity+in+vivo+in+comparison+to+an+MMP-activatable+probe%5BTitle%5D)+AND+%22Contrast+Media+Mol+Imaging%22%5BJournal%5D)">Performance of a new fluorescence-labeled MMP inhibitor to image tumor MMP activity in vivo in comparison to an MMP-activatable probe.</a> Contrast Media Mol Imaging. 8 (1), 1-11 (2013).</li>
<li>Vogl, T., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Alarmin+S100A8%2FS100A9+as+a+biomarker+for+molecular+imaging+of+local+inflammatory+activity%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Alarmin S100A8/S100A9 as a biomarker for molecular imaging of local inflammatory activity.</a> Nat Commun. 5, 4593(2014).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

OI klinik öncesi araştırma, in vivo, moleküler görüntüleme yayılmayan için çok yararlı hızlı ve pahalı olmayan bir araçtır. OI özel bir mukavemeti iltihabik cevaplar gibi yüksek dinamik işlemleri izlemek için özelliğidir. Dahası, OI bir hafta gün arasında değişen geniş bir zaman süresi için bir hastalığın seyrini takip etmesini sağlar. Çok zamana ve maliyet açısından verimli olarak OI, pozitron emisyonu tomografisi (PET) ya da manyetik rezonans görüntüleme (MRI) gibi diğer ...

Romatoid artrit (RA) veya psoriyaz vulgaris gibi otoimmün hastalıklar, gecikmiş tip hipersensitivite reaksiyonları (DTHR) olarak derecelendirilmektedir. 1 RA yaygın erozif sinovit ve eklem yıkımı ile karakterize otoimmün bir hastalıktır. 2 İnflamasyonlu artritik eklemler inflamatuar hücrelerin infiltrasyonu ve proliferasyonunu, proinflamatuar hücrelerin artmış ekspresyonunu, pannus oluşumuna, kıkırdağa ve kemik yıkımına yol açtığını göstermektedir. Matriks metalloproteinazlar (MMP&#39;ler) ile kollajen gibi ekstraselüler matriks moleküllerinin bölünmesi, doku dönüştürme ve anjiyogenez için gereklidir ve doku parçalanmasına neden olur. 5 , 6 Kontak aşırı duyarlılık reaksiyonları (CHR), nötrofillerin bir araya toplanması ile karakterizedir ve oksidatif patlamaya neden olur. 7 Benzer şekilde RA, CHR&#39;deki MMP&#39;ler invol&#39;durkronik enflamasyonu oluşturmak amacıyla doku dönüşümü, hücre göçü ve anjiyogenez ved. RA araştırmak için, glukoz-6-fosfat izomeraz (GPI) Serumda enjeksiyon fare modeli kullanılmıştır. GPI karşı antikorlar ihtiva eden transgenik K / BxN farelerden 8 serum, romatizmal iltihabı, GPI-serumu enjekte edildikten sonra 6. günde şişme ayak bileği, maksimum 24 saat (1.1) içinde gelişmeye başlayan sonra saf BALB / c farelerine enjekte edildi. Kronik CHR analiz etmek için, C57BL / 6 fareleri karın trinitrochlorobenzene (TNCB) ile duyarlı hale getirildi. sağ kulak hassasiyeti 1 hafta sonra başlayarak 5 kata kadar meydan (aynı zamanda 1.1 ve 1.2). Invaziv olmayan küçük hayvan OI esas olarak klinik öncesi araştırmalarda kullanılır fluorescent- chemiluminescent- ve biyolojik olarak ışık veren sinyallerin, in vivo araştırma dayanan bir tekniktir. alınan yarı nicel veriler Molec yönelik anlayışıSağlıklı ve deneysel hayvan modellerinin organ ve dokularındaki ular mekanizmalarını ve uzunlamasına takip ölçümlerini ( örn . , In vivo terapötik yanıt profillerini değerlendirmek için) sağlar. Uzunlamasına çalışmaların büyük bir avantajı, hayvan sayılarının azaltılmasıdır; çünkü aynı hayvanlar, zaman noktası başına farklı fareler kullanmak yerine, birkaç zaman noktasında yapılan takip çalışmalarında ölçülebilir. OI&#39;nın çözümü, deney hayvanlarında organların ve hatta daha küçük doku yapılarının ayrıntılı fonksiyonel görüntülemesine olanak tanır. Dar transmisyon spektrumu, ışık geçirmez bir &quot;karanlık kutu&quot; ile dağınık ışığa karşı koruma ve -70 ° C&#39;ye kadar birçok cihazda soğutulan hassas bir şarj kuplajlı cihaz (CCD) kamera ile özel uyarma ve emisyon filtreleri kullanımı , Floresans sinyallerinin son derece spesifik ve hassas ölçümlerini sağlar. Uyarıcı ile floresan ajanlar kullanarak - vekızıl ötesine yakın fluoresans penceresinde emisyon spektrumu (650-950 nm), bir sinyal-gürültü oranı önemli ölçüde geliştirilebilir. yakın kızılötesi fluoresans pencere hemoglobin ve su ile sinyalin nispeten düşük bir emme yanı sıra düşük bir arkaplan otomatik floresans ile karakterize edilir. 9 Bu küçük hayvan dokusu içinde yukarı 2 cm bir penetrasyon derinliğine sağlar. OI-sondalar ile doğrudan (bir floresan etiketli antikor ile) bir hedef adres ya da (proteazlar ile), hedef doku içinde aktif hale getirilebilir. Aktive OI problar bağlı başka bir etki, molekül içindeki uyarım enerji aktaran bir söndürme kısım, Förster rezonans enerji transferi (FRET) kendi inaktive edilmiş biçimde optik olarak sessizdir. boya (örneğin, bir proteaz tarafından) ile bölünmesi durumunda enerji artık molekül içinde aktarılır ve bir flüoresan sinyal OI ile tespit edilebilir. Bu yüksek specificit ile OI sondaları tasarlanmasını sağlayanFarklı biyolojik süreçler ve mükemmel sinyal / gürültü oranları için. Aşağıdaki protokol, in vivo MMP-2, -3, -9 ve -13 aktivitesini ve inflamasyonun iki deneysel modelini (RA, CHR) görüntülemeye yönelik bir Aktive Edilebilir OI probu kullanarak hayvanların hazırlanmasını, OI ölçümlerini detaylı olarak açıklamaktadır.

<table><tbody><tr><td>Cornergel</td><td>Gerhard Mann GmbH</td><td>1224635</td><td>oftalmik merhem&nbsp;</td></tr><tr><td>Forene</td><td>Abbott GmbH</td><td>4831850</td><td>izofluran</td></tr><tr><td>U40 insülin şırıngası</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>324876</td><td></td></tr><tr><td>Heparin</td><td>Sintetica</td><td>6093089</td><td></td></tr><tr><td>High-Med-PE 0,28 x 0,61 mm</td><td>Reichelt Chemietechnik GmbH+Co</td><td>28460</td><td>polietilen boru, iç çap 0,28 mm, dış çap 0,61 μnsp; mm&nbsp;</td></tr><tr><td>BD Normal Konik İğneler, 30 G</td><td>Becton Dickinson & Co. Ltd.</td><td></td><td>305106 30 G enjeksiyon kanülü</td></tr><tr><td>RTA-0011 izofluran buharlaştırıcı</td><td></td> <td>Vetland Medical Sales and Services LLC-Artagain</td><td></td></tr> <tr><td>çizim kağıdı</td><td>Strathmore Sanatçı Kağıdı</td><td>446-8</td><td>kömür siyahı</td></tr><tr><td>IVIS Spectrum</td><td>Perkin Elmer</td><td>124262</td><td>Optik görüntüleme sistemi</td></tr><tr><td>BD Düzenli Konik İğneler, 25 G</td><td>Becton Dickinson and Company</td><td>305122</td><td></td></tr><tr><td>2-Kloro-1,3,5-trinitrobenzen</td><td>Sigma Aldrich GmbH</td><td>7987456F</td><td>TNCB</td></tr><tr><td>MMPSense 680</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td>NEV10126</td><td>floresan görüntüleme boyası</td></tr><tr><td>Oditest&nbsp;</td><td>Koreplin GmbH</td><td>C1X018</td><td>mekanik ölçüm</td></tr><tr><td>Miglyol 812</td><td>SASOL-Oil</td><td></td><td></td></tr><tr><td>&nbsp; BALB/C, C57BL/6</td><td>Charles River Laboratuvarları&nbsp;</td><td>-</td><td></td></tr><tr>RA serumunun seyreltilmesi için<td>PBS</td><td>Sigma Aldrich GmbH</td><td></td> deneyimleri için kullanılan <td>fareler&nbsp;</td></tr><tr><td>Pipet (100 & mikro; L)</td><td>Eppendorf&nbsp;</td><td></td><td>TNCB uygulaması için kullanılır&nbsp;</td></tr><tr><td>tıraş makinesi&nbsp;</td><td>Wahl&nbsp;</td><td>9962</td><td>Hayvan tüyü düzeltici</td></tr><tr><td>Living Image&nbsp;</td><td>Perkin Elmer&nbsp;</td><td></td><td>OI'yi ölçmek için görüntüleme yazılımı</td></tr></tbody></table>

non-invaziv<emin vivo</em&gt; aktive edilebilir floresan görüntüleme ajanını kullanan İnflamatuvar mmp aktivitesinin flüoresan optik görüntülemesi

Non-invasive In Vivo Fluorescence Optical Imaging of Inflammatory MMP Activity Using an Activatable Fluorescent Imaging Agent

Bu çalışma, enflamasyon, iki farklı fare modellerinde, görüntüleme matriks metalloproteinaz (MMP) bir aktive flüoresan sonda ile -Aktiflik yoluyla in vivo olarak floresans optik görüntüleme (Ol) için invazif olmayan bir yöntem açıklanmaktadır: romatoid artrit (RA), ve bir kayıt hipersensitivite reaksiyonu (CHR) modeli. yakın kızılötesi (NIR) penceresinde bir dalga boyuna sahip ışık (650-950 nm) 650 nm&#39;nin altında kıyasla daha derin bir doku penetrasyonu ve en az bir sinyal emilimini sağlar. floresan OI kullanılarak en önemli avantajlardan biri, ucuz, hızlı ve farklı hayvan modellerinde uygulanması kolay olmasıdır. Aktive floresan probları inaktive eyalette optik sessiz, ancak bir proteaz tarafından aktive edildiği zaman, son derece flüoresan hale gelir. Aktif MMP&#39;ler doku tahribatına yol açan ve RA ve CHR olarak gecikmeli tipte aşırı duyarlılık reaksiyonları (DTHRs) hastalık ilerlemesinde önemli bir rol oynar. Ayrıca, MMPler olanKıkırdak ve kemik bozulması için anahtar proteazlar ve pro-inflamatuar sitokinlere yanıt olarak makrofajlar, fibroblastlar ve kondrositler tarafından indüklenir. Burada, MMP-2, -3, -9 ve -13 gibi anahtar MMP&#39;ler tarafından aktive edilen bir prob kullanıyor ve RA ve kontrol farelerinde, hastalık indüksiyondan 6 gün sonra da MMP aktivitesinin yakın kızılötesi floresan OI için bir görüntüleme protokolü tanımlıyoruz Sağlıklı kulaklara kıyasla sağ kulakta akut (1x meydan okuma) ve kronik (5x meydan okuma) CHR bulunan farelerde olduğu gibi.

Sığır BALB / c farelerinde romatizmal artrit (RA) indüklemek için hayvanlar 0 günde GPI&#39;ye karşı oto-antikorlar (1x PBS ile 1: 1 seyreltme) ile ip enjekte edildi. Bu GPI serumunda indüklenen maksimum iltihaplanma (ayak bileği şişmesi) RA modeli enjeksiyon sonrası 6. günde 11 . Bu nedenle, aktive edilebilir OI boya 2 nmol hazırlandı ve 5. günde artritik farelerin ve sağlıklı kontrol hayvanlarının kuyruk damarına iv enjekte edildi. Enjeksiyonda...

Bu yazıda, iltihaplanmanın iki farklı deneysel modelindeki temel matris metalloproteinazların in vivo aktivitesini görselleştirmek için aktive edilebilir bir optik görüntüleme probu kullanılarak floresan görüntülemenin uygulanmasını açıklanmaktadır.

Non-invaziv<emIn vivo</em&gt; Aktive Edilebilir Floresan Görüntüleme Ajanını Kullanan İnflamatuvar MMP Aktivitesinin Flüoresan Optik Görüntülemesi

This paper describes a non-invasive method for imaging matrix metalloproteinases (MMP)-activity by an activatable fluorescent probe, via in vivo ...

Bu prosedürün genel amacı, inflamasyonun deneysel modellerinde temel matriks metalloproteinazların veya MMP'lerin in vivo aktivitesini değerlendirmek için aktive edilebilir bir probu görselleştirmek amacıyla optik görüntüleme kullanmaktır. Bu yöntem, inflamatuar hastalıkların temelindeki biyolojik mekanizmalara dair temel soruların yanıtlanmasına yardımcı olabilir. Bu tekniğin temel avantajları hızlı, ucuz ve öğrenilmesinin kolay olmasıdır.Ayrıca, farklı biyolojik süreçleri hedefleyen çok çeşitli problar mevcuttur. Romatoid artrit indüksiyonu için öncelikle, bir mikrometre kullanarak her hayvanın tüm ayak bileği çaplarını ölçün. Ardından, ilk fareyi kuyruğundan nazikçe kaldırın ve glikoz altı fosfat izomeraz veya GPI'ye karşı antikorlar içeren 200 µL seyreltilmiş KBN fare serumunu intraperitonal olarak enjekte edin.Ardından hayvanı kafesine geri yerleştirin ve altıncı güne kadar ayak bileği şişliğini günlük olarak ölçün. Kontak hipersensitivite sensitizasyonu için, anestezi altındaki bir farenin karnından iki çarpı iki santimetrelik bir alanı küçük bir hayvan tüy kırpma makinesiyle dikkatlice tıraş edin ve açığa çıkan deriye taze hazırlanmış %5 TNCB çözeltisinden 80 µL uygulamak iç

non-invasive-vivo-fluorescence-optical-imaging-inflammatory-mmp

Research

JoVE Journal

Immunology and Infection

İmmünoloji ve Enfeksiyon

Bu videoda, floresan aracılı tomografi (FMT) kullanılarak bir fare kolit modelinde bağırsak makrofaj infiltrasyonunu değerlendirmek için bir teknik gösterilmektedir. Dekstran sodyum sülfat (DSS) yoluyla bir farede kolit indüklendikten sonra, hayvana kolondaki sızmış makrofajlar üzerindeki F4 / 80 glikoprotein markörünü tanıyan antikorlar enjekte edilir. Fare daha sonra floresan ve yansıma sinyallerinin floresanın uzamsal dağılımını ve yoğunluğunu belirlemek için üç boyutlu bir görüntüye yeniden...

Murin bağırsak iltihabını değerlendirmek için floresan aracılı tomografi kullanma

Biz inflamatuvar aşamaları ayırt için invaziv olmayan bir görüntüleme yöntemi açıklanmaktadır. Luminol sistemik teslim nötrofillerinde MPO aktivitesi bağlı akut inflamasyon alanları ortaya koymaktadır. Bunun aksine, lusigenin enjeksiyon makrofajlarda Phox aktivitesi bağlı kronik inflamasyon görselleştirme sağlar.

In vivo Görüntüleme Yöntemi Akut ve Kronik İltihap ayırt

Biz, çok açılı bir dönme optik görüntüleme saposin C (SapC)-dioleoylphosphatidylserine (DOPS) nanovesicles tarafından sağlanan bir floresan marker in vivo nicelendirilmesi için (Maroi) sistemi tarif eder. Kanser ve artrit fare modelleri istihdam biz Maroi sinyal eğrisi analizi kesin haritalama ve hastalık süreçlerinin biyolojik karakterizasyonu için nasıl kullanılabileceğini göstermektedir.

Floresan SapC-DOPS Nanovesicles kullanma Beyin Tümörleri ve Artrit Vivo Optik Görüntüleme

Hücre dışı matris yara iyileşmesi, iltihap ve kanser gelişimi sürecinde önemli bir yeniden şekil alır. Biz lifimsi dinamiklerinin yanı sıra Epifloresans veya iki-foton mikroskopi kullanılarak yüksek uzaysal ve zamansal çözünürlüğe sahip örgü benzeri matris bileşenleri görselleştirmek için yeni bir Intravital immunofloresan mikroskopi yaklaşım sunmak.

Epifluoresan ile Doku Matrix Bileşenler ve İki foton Mikroskopi uzun vadeli Intravital İmmünofloresan Görüntüleme

in vivo görüntüleme için floroforların kullanımı, opsonizasyon, hızlı klirens, düşük saptama hassasiyeti ve konakçı üzerindeki sitotoksik etkiler nedeniyle büyük ölçüde sınırlanabilir. Floroforların lipozomlardaki film hidrasyonu ve ekstrüzyon ile kapsüllenmesi, floresan söndürme ve korumaya yol açar, bu da yüksek algılama hassasiyeti ile in vivo görüntülemeyi mümkün kılar.

Aracı Olarak bir lipozomal-kapsüllü Yakın-Kızılötesi floroforun Floresan-söndürme İn Vivo Optik Görüntüleme

Anestezi uygulanmış farelerde intravital konfokal mikroskopi kullanarak kararlı durum ve enflamatuar koşullar altında mezenterik venlerdeki nötrofillerin ve monositlerin davranışını izlemek için bir protokolü detaylandırıyoruz.

Real Time Anestetize Farelerde Intravital Mikroskopi Mezenterik Damarlardaki nötrofiller ve monositler Görüntüleme

enflamasyon bölgelerinde CD4 efektör T hücrelerinin geçiş motilite yöneten mekanizma nispeten bilinmemektedir. Biz görselleştirmek ve yerinde bu hücrelerin dinamik davranışının çalışması için izin iltihaplı kulak dermiş in vitro -astarlı CD4 T hücrelerinde işlemek için non-invaziv bir yaklaşım sunuyoruz.

Iltihaplı Dermisinde içinde görüntüleme CD4 + T hücre Geçiş Göç

Biz, in vivo canlı biyolüminesans ve yakın kızılötesi SJL / J farelerinde multipl skleroz için deneysel otoimmün ensefalomyelit (EAE) modelinde optik nevrit ve ensefalit görüntüleme tekniğini göstermektedir.

Farelerde Multipl Skleroz EAE Modeli Optik Nörit ve Beyin Enflamasyon Biyoparlaklık ve Yakın-Kızılötesi Görüntüleme

Hedef özgü probları protein ifade çeşitli hastalık (Örneğin, iltihap, enfeksiyon ve tumorigenesis) gibi moleküler mekanizmaları analiz etmek için yenilikçi bir araç temsil eder. Bu çalışmada, bağırsak makrofaj infiltrasyonu F4/80 özel tomografi Floresans aracılı kullanarak kolit, fare modeli üç boyutlu bir nicel tomografik değerlendirilmesi açıklar.

Floresan-aracılı tomografi algılama ve fare bağırsak iltihabı makrofaj ile ilgili miktar

Morfolojik değişiklikler, aktivasyon sonrasında bağışıklık duyarlı fibroblast hücrelerinde ortaya çıkar ve hücresel işe alma değişiklikleri teşvik. Genetik olarak tasarlanan fibroblast spesifik protein 1 (FSP1)-CRE ile birlikte 2-foton görüntülemenin kullanılması; tdtomato floxed-dur-floxed (TB/TB) fare hattı ve yeşil floresan etiketlenmiş lipopolisakkarid-fitc, biz dermal fibroblastlar ve morfolojik değişiklikler içinde lipopolisakkarid son derece spesifik alımı göstermek olabilir vivo.

İn vivo Iki renkli 2-foton görüntüleme genetiği etiketlenmiş Reporter hücrelerinin cilt içinde

Keşfedin, aktive edilebilir floresan optik görüntüleme probu kullanarak inflamatuvar hastalıklarda matris metaloproteinaz (MMP) aktivitesini canlı modellerde görselleştirme yöntemini. Bu teknik, iltihaplanma mekanizmalarını hızlı ve etkili şekilde incelemek için idealdir.

Non-invaziv Aktive Edilebilir Floresan Görüntüleme Ajanını Kullanan İnflamatuvar MMP Aktivitesinin Flüoresan Optik Görüntülemesi (Video) | JoVE Journal

Non-invaziv

Daha fazla video keşfet