Det här protokollet beskriver en detaljerad metod för att upptäcka H2O2 lokalisering inom Solea senegalensis spermier med en känslig fluorokrom DCFH-DA för ROS, en levande mitokondrier fläcken för mitokondrier och DAPI för kärnor visualisering, respektive. Protokollet är avsett att utföras inom 2 h med antingen färska eller tinade spermier.