Journal
/
Génétique
/
En standardmetode til at undersøge ejendommen mutagenicitet som en funktion af punkt Mutation reparation katalyseret af CRISPR/Cas9 og SsODN i humane celler
Journal JoVE
Génétique
This content is Free Access.
Journal JoVE Génétique
A Standard Methodology to Examine On-site Mutagenicity As a Function of Point Mutation Repair Catalyzed by CRISPR/Cas9 and SsODN in Human Cells

En standardmetode til at undersøge ejendommen mutagenicitet som en funktion af punkt Mutation reparation katalyseret af CRISPR/Cas9 og SsODN i humane celler

DOI:
10.3791/56195-v

•

10:07 min

•

August 25, 2017

•

,
1Gene Editing Institute, Helen F. Graham Cancer Center and Research Institute,Christiana Care Health Services, 2Department of Medical Sciences,University of Delaware

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 00:38Cell Line, Culture Conditions, and Harvest
  • 01:57Plating the Cells and Releasing Them from Aphidicolin Synchronization
  • 02:44RNA Complexing
  • 04:13Harvesting the Cells for Targeting
  • 05:30Targeting Samples
  • 06:13Analysis of Gene Edited Cells and Transfection Efficiency
  • 06:57DNA Sequence Analysis
  • 07:56Results: Effective Point Mutation Repair
  • 09:41Conclusion

Summary

Traduction automatique

Traduction automatique

Denne protokol beskriver arbejdsgangen i et CRISPR/Cas9-baserede gen redigering system til reparation af punktmutationer i pattedyrsceller. Her bruger vi en kombinatorisk tilgang til gen redigering med en detaljeret opfølgende eksperimentelle strategi for måling indel dannelse på destinationsstedet — i det væsentlige, analysere onsite mutagenese.

Tags

CRISPR/Cas9SsODNOn-site MutagenesisHomology Directed RepairGene CorrectionHTT116 CellsTrypan BlueHemocytometerAphidicolinEGFP GeneGuide SequencesCrRNATracrRNA

Article

Embed

AJOUTER À LA PLAYLIST

Usage Statistics

Vidéos Connexes

check_url/fr/56195?article_type=v

QTL Mapping og CRISPR / Cas9 redigering for at identificere et lægemiddelresistensgen i<em> Toxoplasma gondii</em
check_url/fr/56195?article_type=v

Under anvendelse af et fluorescerende PCR-kapillær gelelektroforese Teknik til genotype CRISPR / Cas9-medieret Knockout Mutanter i et format med høj kapacitet
check_url/fr/56195?article_type=v

Udvælgelsesafhængig og uafhængig generering af CRISPR / Cas9-medierede Gene Knockouts i Pattedyrceller
check_url/fr/56195?article_type=v

CRISPR/Cas9-medieret målrettede Integration In Vivo ved hjælp af en homologi-medieret End at deltage-baseret strategi
check_url/fr/56195?article_type=v

Effektiv produktion og identifikation af CRISPR/Cas9-genereret gen Knockouts i Model System Danio rerio
check_url/fr/56195?article_type=v

Højeffektive gen afbrydelse af Murine og menneskelige hæmatopoietisk stamceller ved CRISPR/Cas9
check_url/fr/56195?article_type=v

En hurtig og letkøbt Pipeline for generering af genomisk punkt mutanter i C. elegans bruger CRISPR/Cas9 Ribonucleoproteins
check_url/fr/56195?article_type=v

CRISPR/Cas9 gen redigering at gøre betinget mutanter af menneskelige Malaria parasitten, P. falciparum
check_url/fr/56195?article_type=v

Endogene Protein Tagging i menneskelige induceret pluripotente stamceller ved hjælp af CRISPR/Cas9
check_url/fr/56195?article_type=v

CRISPR/Cas9 ribonucleoprotein-medieret præcis Genredigering ved Rørelektroporation

Read Article