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Journal JoVE Immunologie et infection
Generation of Discriminative Human Monoclonal Antibodies from Rare Antigen-specific B Cells Circulating in Blood

Geração dos anticorpos monoclonais humanos discriminativa de rara B antígeno-específicas células circulantes no sangue

DOI:
10.3791/56508-v

•

13:14 min

•

February 06, 2018

•

, , ,
1CRCINA, Inserm, CNRS, Université d’Angers,Université de Nantes, 2LabEx IGO, “Immunotherapy, Graft, Oncology”, 3CHU Nantes, France

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 01:17Isolation of Human Peripheral Blood Mononuclear Cells
  • 02:00Tetramer-Associated Magnetic Enrichment of Antigen Specific B-Cells
  • 03:58Staining of Antigen Specific Human B-Cells and Cell Sorting
  • 04:56Single Cell RT-PCR
  • 06:00Screening and Verification of Heavy and Light Chain Expressing Vectors
  • 07:45Production of Monoclonal Antibodies
  • 10:33Results: Detection of Relevant Antigen Specific B-Cells and Generation of Highly Discriminative Monoclonal Antibody from Donor Peripheral Blood Mononuclear Cells
  • 12:41Conclusion

Summary

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Nós descrevemos um método para a produção de anticorpos humanos específicos para um antígeno de interesse, a partir de raras células B que circulam no sangue humano. Geração destes anticorpos naturais é rápida e eficiente, e os anticorpos obtidos podem discriminar entre antígenos altamente relacionados.

Tags

Keywords: Human Monoclonal AntibodiesAntigen-specific B CellsBloodDiscriminative AntibodiesImmunotherapyB LymphocytesDensity GradientMononuclear CellsTetramersMagnetic MicrobeadsCell Separation

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