Journal
/
Recherche en cancérologie
/
Ved hjælp af CRISPR/Cas9 gen redigering til at undersøge de muterede aktivitet af Mutant Calreticulin i cytokin afhængige hæmatopoietisk celler
Journal JoVE
Recherche en cancérologie
Un abonnement à JoVE est nécessaire pour voir ce contenu.  Connectez-vous ou commencez votre essai gratuit.
Journal JoVE Recherche en cancérologie
Using CRISPR/Cas9 Gene Editing to Investigate the Oncogenic Activity of Mutant Calreticulin in Cytokine Dependent Hematopoietic Cells

Ved hjælp af CRISPR/Cas9 gen redigering til at undersøge de muterede aktivitet af Mutant Calreticulin i cytokin afhængige hæmatopoietisk celler

DOI:
10.3791/56726-v

•

10:21 min

•

January 05, 2018

•

,
1Division of Hematology, Department of Medicine,Brigham and Women’s Hospital, Harvard Medical School, 2Broad Institute, 3Dana-Farber Cancer Institute,Harvard Medical School

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 00:44Cloning sgRNA Oligos
  • 01:08Digestion of LentiGuide-puroVector
  • 02:04Ligation of Annealed Oligos into Digested Backbone
  • 03:02Generation of Cell Lines Stably Expressing spCas9
  • 05:40Reporter Assay for Cas9 Activity
  • 06:10Spinfection of sgRNAs into Cas9 Expressing Cells
  • 06:31Ba/F3 Cellular Transformation and Positive Selection using m-IL3 Withdrawal
  • 07:23Results: Use of CRISPR/Cas9 Tool and Ba/F3 Cellular Transformation to Study Oncogenic Potential of Mutated Calreticulin
  • 09:02Conclusion

Summary

Traduction automatique

Traduction automatique

Målrettet gen redigering bruger CRISPR/Cas9 har høj grad lettet forståelsen af de biologiske funktioner af gener. Her, udnytte vi CRISPR/Cas9 metoden til model calreticulin mutationer i cytokin-afhængige hæmatopoietisk celler for at studere deres mutationer aktivitet.

Tags

Keywords: CRISPR/Cas9Gene EditingCalreticulinOncogenic ActivityCytokine Dependent Hematopoietic CellsHematological MalignanciesLentiGuide-Puro VectorBsmB1 Restriction EnzymePhosphataseLigationSTBL3 CellsHEK293T CellsTransfection

Article

Embed

AJOUTER À LA PLAYLIST

Usage Statistics

Vidéos Connexes

check_url/fr/56726?article_type=v

Det<em> Drosophila</em> Imaginære Disc Tumor Model: Visualisering og Kvantificering af genekspression og tumorindtrængen Brug Genetic Mosaics
check_url/fr/56726?article_type=v

Fabrikation af tungen ekstracellulære Matrix og rekonstituering af tungen planocellulært karcinom In Vitro
check_url/fr/56726?article_type=v

Phosphopeptide berigelse kombineret med etiket-fri kvantitativ massespektrometri til at undersøge Phosphoproteome i Prostata Cancer
check_url/fr/56726?article_type=v

Undersøgelse af genetiske afhængigheder ved hjælp af CRISPR-Cas9-baserede konkurrence Assays
check_url/fr/56726?article_type=v

Brug af CRISPR/Cas9 til at udskære GM-CSF i bil-T-celler
check_url/fr/56726?article_type=v

Rumlig og tidsmæssig kontrol af murine melanom initiering fra mutant melanocyte stamceller
check_url/fr/56726?article_type=v

Onkogen Genfusions detektering ved hjælp af forankret multiplex Polymerasekæde reaktion efterfulgt af næste generations sekvensering
check_url/fr/56726?article_type=v

Isolering og udvidelse af cytotoksiske cytokin-induceret Killer T Celler til kræftbehandling
check_url/fr/56726?article_type=v

Kortlægning af strukturfunktionsforhold for uordnede onkogene transskriptionsfaktorer ved hjælp af transskriptomisk analyse
check_url/fr/56726?article_type=v

In Vitro evaluering af onkogene transformation i humane mammary epitelceller

Read Article