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Una quantitativa Dot Blot Assay AAV titolazione e suo uso per la valutazione funzionale di Virus Adeno-associato Assembly-attivazione proteine
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Journal JoVE Biologie
A Quantitative Dot Blot Assay for AAV Titration and Its Use for Functional Assessment of the Adeno-associated Virus Assembly-activating Proteins
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Una quantitativa Dot Blot Assay AAV titolazione e suo uso per la valutazione funzionale di Virus Adeno-associato Assembly-attivazione proteine

DOI:
10.3791/56766-v

•

14:49 min

•

June 12, 2018

•

, , ,
1Department of Molecular and Medical Genetics,Oregon Health & Science University, 2Department of Molecular Microbiology and Immunology,Oregon Health & Science University

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:46Production of AAV in HEK 293 Cells by Plasmid DNA Transfection
  • 02:50Recovery of Viral Particles, and Treatment with Serratia marcescens Endonuclease and Proteinase K
  • 04:20Phenol-choloroform Extraction, Ethanol Precipitation, and Preparation of Plasmid DNA Standards
  • 05:55Dot Blot Assay
  • 08:46Hybridization and Washing
  • 10:50Results: AAV Titration and Functional Assessment of AAP Proteins Using a Quantitative Dot Blot Assay
  • 12:58Conclusion

Summary

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Questo manoscritto dettagli un saggio di macchia semplice puntino per quantificazione dei titoli del virus adeno-associato (AAV) e la sua applicazione per studiare il ruolo dell'Assemblea-attivazione proteine (AAP), una nuova classe di proteine virali non strutturali, trovate tutte le AAV sierotipi, nel promuovere l'assemblaggio di capsidi derivato da sierotipi AAV cognati ed eterologi.

Tags

Quantitative Dot BlotAAV TitrationAAV Assembly-activating ProteinsAAV Vector QuantitationHEK 293 Cell TransfectionVirus ProductionAAV RecoveryCell Debris Pelleting

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