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Using Three-color Single-molecule FRET to Study the Correlation of Protein Interactions

Usando três cores único-molécula FRET para estudar a correlação de interações da proteína

DOI:
10.3791/56896-v

•

11:22 min

•

January 30, 2018

•

, , ,
1Institute of Physical Chemistry,University of Freiburg, 2Department of Bionanoscience, Kavli Institute of Nanoscience Delft,Delft University of Technology

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 00:37Total Internal Reflection Fluorescence Microscope (TIRFM) Flow Chamber Assembly
  • 02:15Three-color smFRET Measurement of Hsp90
  • 05:52Data Analysis
  • 09:08Results: Protein Interactions of Hsp90
  • 10:47Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos um protocolo para obter dados de três cores de smFRET e sua análise com um ensemble 3D Hidden Markov modelo. Com esta abordagem, cientistas podem extrair informações cinéticas de sistemas complexos proteína, incluindo cooperatividade ou interações correlacionadas.

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Keywords: Three-color Single-molecule FRETProtein InteractionsCooperativityQuantitative BiologyProtein ComplexesDynamic InteractionsFlow Chamber AssemblyPEG-biotin Functionalized SlideMulti-color Prism TIRF MicroscopeEMCCD Camera Configuration

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