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一种简便、快速、定量的测定 DNA 蛋白 Crosslinks 在转染哺乳动物细胞中的研究

Journal JoVE
Génétique

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A Simple, Rapid, and Quantitative Assay to Measure Repair of DNA-protein Crosslinks on Plasmids Transfected into Mammalian Cells

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一种简便、快速、定量的测定 DNA 蛋白 Crosslinks 在转染哺乳动物细胞中的研究

DOI:

10.3791/57413-v

•

11:58 min

•

March 05, 2018

•

Lisa N. Chesner, Colin Campbell

¹Department of Pharmacology,University of Minnesota

Chapitres

00:04Titre
01:18Generation of DNA-protein Crosslink Containing Plasmid
06:21Transfection into Mammalian Cells
08:39SSPE-qPCR
10:02Results: Use of Strand-specific Primer Extension Based q-PCR to Quantify the DNA-protein Crosslinks
11:08Conclusion

Summary

Traduction automatique

本协议的目的是量化在质粒 dna 上对定义的 dna 蛋白 crosslinks 的修复。损伤质粒被转染成受体哺乳动物细胞系和低分子量, 在多时间点后再染。DNA 修复动力学的量化使用链特定引伸后, qPCR。

Tags

DNA-protein Crosslinks Plasmid DNA Mammalian Cells DNA Repair Trans-Pacific Primer Extension QPCR Assay Adducts Polymerase Blocking House Cell Reactivation 8-oxoguanine T4 Polynucleotide Kinase Primer Extension Phenol-chloroform Extraction

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