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Metodologia para detecção precisa de metilação do DNA mitocondrial
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Methodology for Accurate Detection of Mitochondrial DNA Methylation

Metodologia para detecção precisa de metilação do DNA mitocondrial

DOI:
10.3791/57772-v

•

12:11 min

•

May 20, 2018

•

, ,
1The Novo Nordisk Foundation for Basic Metabolic Research, Faculty of Health and Medical Sciences,University of Copenhagen

Chapitres

  • 00:05Titre
  • 00:35Restriction Enzyme Treatment, Bisulfite Conversion, and Design of Bisulfite Sequencing Primers
  • 01:54Bisulfite Converted PCR and Gel Extraction
  • 04:16Bisulfite Sequencing Library Preparation
  • 10:44Results: Accurate Quantification of mtDNA Methylation
  • 11:48Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos um protocolo para permitir que a quantificação exata de metilação de DNA (mtDNA) mitocondrial. Neste protocolo, descrevemos uma digestão enzimática de DNA com BamHI juntamente com um pipeline de análise de bioinformatic que pode ser usado para evitar a superestimação dos níveis de metilação do DNA mitocondrial causada pela estrutura secundária do DNA mitocondrial.

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Mitochondrial DNA MethylationBisulfite SequencingPCR AmplificationPrimer DesignBiSearchMitochondrial Genome RegionsPCR ConditionsGel ElectrophoresisDNA Extraction

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