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Purificación y reconstitución de TRPV1 para análisis espectroscópico
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Purification and Reconstitution of TRPV1 for Spectroscopic Analysis
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Purificación y reconstitución de TRPV1 para análisis espectroscópico

DOI:
10.3791/57796-v

•

11:53 min

•

July 03, 2018

•

, , , ,
1Department of Physiology,University of Tennessee Health Science Center, 2Department of Molecular Physiology and Biophysics,Vanderbilt University Medical Center, 3CuriRX, Inc.

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:54TRPV1 Mutagenesis
  • 02:19Generating the Recombinant Bacmid and Baculovirus for Protein Expression
  • 05:14eTRPV1 and Single-cysteine Mutant Purification
  • 07:18eTRPV1 Single-cysteine Mutant Site-directed Spin Labeling
  • 08:12eTRPV1 Spin-labeled Single Cysteine Mutant Reconstitution
  • 09:30Results: Characterization of the Minimal Cysteine-less TRPV1 Construct and Single-cysteine Mutants used for Spectroscopic Analysis
  • 11:08Conclusion

Summary

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Este artículo describe métodos específicos para obtener cantidades bioquímicas de detergente solubilizado TRPV1 para análisis espectroscópico. Los protocolos combinados proporcionan herramientas bioquímicas y biofísicas que se pueden adaptar para facilitar los estudios estructurales y funcionales de canales del ion mamíferos en un ambiente controlado por membrana.

Tags

Keywords: TRPV1Ion ChannelSpectroscopic AnalysisElectron Paramagnetic ResonanceDouble Electron Electron ResonanceConformational ChangesThermal GatingLight-independent GatingPCR MutagenesisRecombinant BacmidETRPV1Cysteine Mutants

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