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Uma medida quantitativa de espécies reativas de oxigênio e senescência-associado fenótipo secretor em fibroblastos humanos normais durante a senescência induzida pelo Oncogene
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Journal JoVE Biologie du développement
A Quantitative Measurement of Reactive Oxygen Species and Senescence-associated Secretory Phenotype in Normal Human Fibroblasts During Oncogene-induced Senescence

Uma medida quantitativa de espécies reativas de oxigênio e senescência-associado fenótipo secretor em fibroblastos humanos normais durante a senescência induzida pelo Oncogene

DOI:
10.3791/57890-v

•

13:59 min

•

August 12, 2018

•

, ,
1Department of Biochemistry, College of Medicine,Dong-A University, 2Peripheral Neuropathy Research Center, College of Medicine,Dong-A University

Chapitres

  • 00:00Titre
  • 01:10Inducing Oncogene-induced Senescence
  • 03:11Monitoring Senescence by Senescence Associated ß-galactosidase (SA ß-gal) Staining
  • 04:27Quantifying ROS Induction during OIS
  • 06:42Quantifying IL-6 and IL-8 mRNA Expression for SASP Anaylsis using Real-time PCR
  • 08:53Quantifying the Levels of Secreted IL-6 and IL-8 Proteins for SASP Analysis using ELISA
  • 10:56Results: Representative ROS and SASP Expression Analysis during H-Ras-induced Senescence
  • 12:25Conclusion

Summary

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ROS intracelular foi mostrado para jogar um papel importante na indução da senescência celular. Aqui, descrevemos um ensaio sensível para quantificação dos níveis ROS durante a senescência celular. Nós também fornecemos protocolos para avaliar o fenótipo secretor associada a senescência, que alegadamente contribui para várias desordens relacionadas com a idade.

Tags

Keywords: ROSReactive Oxygen SpeciesSenescence-associated Secretory PhenotypeSASPH-RasOncogene-induced SenescenceWI-38 FibroblastsIntracellular ROSIL-6IL-8BOSC CellsRetroviral DNAPolybrenePuromycinSA Beta-gal Staining

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