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Reação em Cadeia da Polimerase Digital de Gota Única para Detecção Abrangente e Simultânea de Mutações em Regiões de Hotspot
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Single Droplet Digital Polymerase Chain Reaction for Comprehensive and Simultaneous Detection of Mutations in Hotspot Regions

Reação em Cadeia da Polimerase Digital de Gota Única para Detecção Abrangente e Simultânea de Mutações em Regiões de Hotspot

DOI:
10.3791/58051-v

•

08:23 min

•

September 25, 2018

•

, , , , , ,
1Circulating Tumor Biomarkers Laboratory, SiRIC, Translational Research Department,Institut Curie, PSL Research University, 2CNRS UMR144,Institut Curie, PSL Research University, 3Department of Medical Oncology,Institut Curie, PSL Research University, 4University Versailles Saint-Quentin-en-Yvelines, 5University Paris Descartes, 6Inserm U830,Institut Curie, PSL Research University

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:48Blood Collection and Plasma Storage
  • 02:04cfDNA Extraction
  • 04:45ddPCR Mix Preparation
  • 05:46Droplet Generation
  • 06:25PCR Amplification
  • 07:06Results: KRAS and EGFR Drop-off ddPCR Assays
  • 07:50Conclusion

Summary

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Aqui, apresentamos um protocolo para quantificar com precisão a múltiplas alterações genéticas de uma região de destino em uma única reação usando ddPCR de entrega e um único par de testes de hidrólise.

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Single Droplet Digital PCRCirculating Tumor DNAMutation DetectionHotspot RegionsCancer DiagnosisAbsolute QuantificationMolecular AnalysisQPCR AlternativePlasma ExtractionProteinase KLysis BufferSilica MembraneVacuum Pump

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