Occlusie van de middelste cerebrale slagader waardoor reperfusie via gemeenschappelijke halsslagader reparatie in muizen

Deze methode kan helpen bij het beantwoorden van belangrijke vragen in het veld experimentele lijn, zoals hoe u de samenhang met deze modellen verminderen en hoe de reproduceerbaarheid kan worden verbeterd. Het belangrijkste voordeel van deze techniek is dat het re-perfusie via de gemeenschappelijke halsslagader mogelijk maakt, en daarom niet afhankelijk is van de cirkel van Willis, die anatomisch kan variëren tussen dieren, en daarom kan bijdragen aan de variabiliteit gezien in experimentele uitkomstmaatregelen. Visuele demonstratie van deze methode is van cruciaal belang, omdat de CCA-herstelstappen moeilijk te leren zijn vanwege de technische problemen die gepaard gaan met het gebruik van de kit om ervoor te zorgen dat de CCA volledig patent heeft, na reparatie.

Om te beginnen, voor te bereiden en verdoven de muis volgens het testprotocol. Gebruik dan een nummer 15 scalpel mes om een 1,5 cm middellijn incisie op de blootgestelde ventrale nek te maken. Met behulp van stompe dissectie technieken, voorzichtig intrekken van de speekselklieren aan de zijkant, om de luchtpijp bloot.

Ontleden dan de gemeenschappelijke halsslagader, of CCA, vrij van het omringende weefsel en vagalzenuw. Na deze, passeren twee kleine delen van een niet-oplosbare 6-0 hechting onder de CCA, dorsale naar de CCA, en ventrale aan de vagale zenuw. Teken een zijden stropdas dichter bij de chirurg, en bind het losjes rond de CCA.

Dan losjes binden een tweede zijden stropdas in de richting van de splitsing van de interne en externe halsslagaders. Breng vervolgens een microvasculaire clip net boven de distale das aan, zodat de splitsing niet wordt belemmerd. Gebruik micro veneuze schaar om een klein gaatje in de CCA te maken.

Steek een 7-0 siliconen gecoate microfilament in de CCA en ga naar de microvasculaire clip. Draai vervolgens de distale das aan om de gloeidraad op zijn plaats vast te maken. En gebruik cliphouders om de microvasculaire clip te verwijderen.

Vervolgens, vooraf de gloeidraad in de interne halsslagader, of ICA. Zodra de gloeidraad hoofd passeert de distale stropdas, trek de das strakker, om bloedverlies te voorkomen. Met behulp van de distale zijden das, til en trek de CCA aan de buitenkant van het lichaam van de muis, en stuur de gloeidraad naar de bocht, voorbij de opening van de pterygopalatine slagader, of PPA.

Zodra de gloeidraad op zijn plaats is, zet het vast door de distale zijdeband verder aan te scherpen. Trek aan het einde van de MCAO-periode de gloeidraad in totdat de witte gloeidraadkop duidelijk zichtbaar is. Maak vervolgens de distale CCA-das net genoeg los om de gloeidraadkop het grootste deel van de weg uit het vat te verwijderen.

Verwijder vervolgens de gloeidraadkop volledig uit het vat. Plaats hierna een microvasculaire clip in de horizontale positie, in de richting van de CCA-splitsing en naast de distale das. Plaats vervolgens een andere clip onder de proximale CCA-das, in de richting van de chirurg.

Gebruik zorgvuldig Dumont 5 tangen om beide zijden banden te verwijderen. En droog het gebied met behulp van steriele wattenstaafjes. Voeg vervolgens Fibrinogen en Thrombin kitoplossingen één en twee toe aan een steriel petrischaaltje.

Met behulp van micro veneuze schaar en stompe dissectie techniek, het verkrijgen van een dunne ventrale plak van sternocleidomastoid spier. Neem vervolgens met Behulp van Dumont 5 tangen het tissuepad en meng het gelijkmatig over de Fibrinogen en Thrombin kitoplossingen. Hier is het belangrijk om ervoor te zorgen dat het weefselpad groot genoeg is om de CCA-incisie te bedekken.

En zodra het over de twee oplossingen wordt gemengd, moet het onmiddellijk over de incisie worden geplaatst, om over-stolling en slechte hechting te verhinderen. Eenmaal gemengd tussen de twee oplossingen, verwijder het weefsel pad aan de CCA incisie. Plaats het weefsel pad plat naar beneden op de incisie met gemiddelde druk, en open tangen.

Verwijder snel de distale microvasculaire clip, terwijl u het weefselkussen op zijn plaats houdt. Vervolgens, langzaam verlichten van de druk van het weefsel pad, waardoor het bloed te stromen onder de incisie gebied. Laat nu langzaam en voorzichtig de druk van de proximale microvasculaire clip los en verwijder deze vervolgens volledig.

Het verwijderen van de bovenste clip maakt het mogelijk een kleine hoeveelheid bloed om de kit te activeren. Een gestage afgifte van de distale clip maakt een geleidelijke drukverhoging op de incisieplaats mogelijk, die verder activeert en helpt een mislukte reparatie te voorkomen. Ten slotte, zodra het vat is verzegeld, hecht de wond met oplosbare 6-0 hechtingen.

In dit protocol, middelste cerebrale slagader occlusie, of MCAO, werd uitgevoerd op 24 volwassen mannelijke muizen. Een vermijding van ECA ligatie en de toevoeging van analgesie toonde een trend in de richting van verminderde gewichtsverlies op 48 uur na MCAO. Vijf minuten na de verwijdering van filamenten nam de regionale cerebrale bloedstroom aanzienlijk toe in het hersengebied van de MCA.

De perfusie werd gehandhaafd tot aan de reparatie van het vat, met een verhoging van perfusie aan het grondgebied MCA, na cca schipreparatie. Dit suggereert dat de CCA reparatie toegestaan verhoogde bloedperfusie naar het ischemische gebied, in vergelijking met de afhankelijkheid van de cirkel van Willis alleen. Een T2 gewogen MRI werd gebruikt om de totale LV en DTI scans te bepalen werden gebruikt om de kern LV te bepalen op 48 uur na MCAO.

Er was geen significant verschil tussen deze twee groepen. Interessant is dat een variabiliteit voor totale en kern LV aanzienlijk werd verminderd in de CCA reparatiegroep. Onze analyse wees uit dat minder dieren per behandelingsgroep nodig zouden zijn om een 30% vermindering van LV aan te tonen, na MCAO, met behulp van CCA-reparatie, versus typische CCA-ligatedprocedure.

Tijdens een poging tot deze procedure, is het belangrijk om te onthouden om ervoor te zorgen het weefsel pack is van voldoende grootte om de CCA incisie te dekken. Ook is de snelheid belangrijk, om te voorkomen dat de kit over-coagulating, voorafgaand aan het plaatsen van de pad op de CCA.