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Expression and Purification of the Human Lipid-sensitive Cation Channel TRPC3 for Structural Determination by Single-particle Cryo-electron Microscopy

Expressão e purificação de TRPC3 os humanos sensíveis lipídico cação canal para determinação estrutural por microscopia de Single-particle Cryo-elétron

DOI:
10.3791/58754-v

•

08:27 min

•

January 07, 2019

•

, , , , ,
1Van Andel Institute, 2Vollum Institute, 3Janelia Research Campus

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:34Infection of HEK293 Mammalian Cells with P2 Baculovirus for Large-scale Protein Expression
  • 02:42Purification of hTRPC3 Protein from the Frozen Cell Pellet
  • 05:26Results: Structural Determination of hTRPC3
  • 07:36Conclusion

Summary

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Este protocolo descreve técnicas utilizadas para determinar as estruturas do canal de íon pela microscopia cryo-elétron, incluindo um sistema de baculovirus usado eficientemente expressar genes em células de mamíferos, com esforço mínimo e toxicidade, extração de proteínas, purificação, e verificação de qualidade, preparação da amostra grade e triagem, bem como coleta de dados e processamento.

Tags

TRPC3Ion ChannelProtein ExpressionProtein PurificationSingle-particle Cryo-electron MicroscopyHEK293 CellsVirus InfectionSodium ButyrateDetergent SolubilizationSize-exclusion ChromatographyUltracentrifugation

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