线虫模型中气单胞菌感染的毒力及发病机制评价

该方法有助于回答宿主-病原体相互作用领域的关键问题，如细菌感染的致病性和毒性。这项技术的主要优点是，我们可以评估Aeromonas物种之间和内部的毒性，并有助于我们了解Aeromonas感染的发病机制。开始用无菌的去iond水清洗大约2000只成年蠕虫。

重复洗涤三次，将蠕虫放在管底。离心后，蠕虫去除上经剂，将蠕虫留在3.5毫升的去水中。在管中加入一毫升次氯酸钠和0.5毫升氢氧化钾。

然后摇动管子6分钟，使蠕虫身体被酶。卵子释放后，加入10毫升的去电化水，以停止解压。然后离心管，拉下鸡蛋，并尽可能多地取出上一代。

用15毫升的M9介质清洗鸡蛋至少三次。将鸡蛋转移到3.5厘米的盘子里，在20摄氏度下孵育一晚。在此之后，从板上去除 10 微升的 L1 蠕虫和 M9 介质。

计算蠕虫，获得M9介质中L1蠕虫的浓度。使用移液器需要 0.5 毫升大肠杆菌 OP50 LB 汤，并铺在 ENGM 板上。然后在37摄氏度下孵育板16至18小时。

将 ENGM 冷却至室温。然后用大肠杆菌OP50在ENGM板上孵育L1蠕虫。在20摄氏度下孵育蠕虫，直到它们达到L4级。

首先，选择四个Aeromonas菌株的单个菌落，并根据文本协议培养它们。然后测量细菌汤的OD 600吸光度并进行调整，直到吸光量等于2.0。下一点，将30微升的细菌肉汤从每个菌株传播到NGM板中。

随机选择并转移先前准备的L4蠕虫到NGM板与Aeronas菌株。然后在20摄氏度下孵育板，直到测定完成。每天将所有活的蠕虫转移到含有细菌的新NGM板。

每天计算活虫、死亡蠕虫和传感器蠕虫的数量，直到最后一个蠕虫死亡。在培养Aeromonas菌株并测量其吸光度之前描述后，将细菌汤在3，500克的离心15分钟。使用 S 中等调节细菌汤。

并在S介质中加入195微升的细菌肉汤，在96孔板的8口井中加入。用它们 M9 介质将蠕虫从 ENGM 板上洗净。然后将蠕虫溶液的浓度调整为每微升五个蠕虫。

将蠕虫溶液的五微升添加到 96 孔板的每个孔中。在摇床上孵育板，并在 24、48 和 72 小时计算活蠕虫的数量。培养气管菌株后，根据文本协议点调节吸收度，将细菌汤扩散到NGM板上。

在此之后，将 50 个 L4 蠕虫转移到每个 NGM 板上。每 24 小时将蠕虫转移到新鲜的 NGM 板中。随机选择 10 种蠕虫，并在幻灯片上将其转移到 M9 介质中的 2% agarose 凝胶中。

最后，在凝胶上放置盖玻片，并在配备摄像头的荧光显微镜上用绿色荧光蛋白过滤器捕捉肌肉图像。在该协议中，对四种Aeromonas菌株的毒性进行了评估。感染A.caviae的C.elegans的存活率在使用A.caviae的检测中最高，在使用A.dhakensis的检测中最低。

在液体毒性测定中，当感染A.dhakensis或A.亲氧病时，C.elegans的存活率显著下降。在肌肉坏死分析程度肌肉损伤不同，在Aeromonas物种。A.caviae 造成的肌肉损伤最少，而 A.dhakensis 造成的肌肉损伤最大。

本视频中描述的方法提供了一种方便的方法来区分Aeromonas物种之间和内部的毒性多样性。此外，它也是研究病原体和宿主之间相互作用的可靠模型。