Journal
/
Biochimie
/
Brug af rekombinant Fusion proteiner i et fluorescerende Protease Assay Platform og deres i-gel genopretning
Journal JoVE
Biochimie
Author Produced
This content is Free Access.
Journal JoVE Biochimie
Use of Recombinant Fusion Proteins in a Fluorescent Protease Assay Platform and Their In-gel Renaturation

Brug af rekombinant Fusion proteiner i et fluorescerende Protease Assay Platform og deres i-gel genopretning

DOI:
10.3791/58824-v

•

19:23 min

•

January 16, 2019

•

, , , ,
1Department of Biochemistry and Molecular Biology, Faculty of Medicine,University of Debrecen, 2Biotechnology Research Department,Gedeon Richter Plc

Chapitres

  • 00:00Titre
  • 01:05Generation of the Substrate-coding Expression Plasmids
  • 02:16Expression of the Fluorescent Substrates
  • 03:35Cell Disruption
  • 04:26Ni-NTA Magnetic Agarose Bead-based Protease Assay
  • 12:39PAGE Analysis
  • 14:41Representative Results
  • 18:29Conclusion

Summary

Traduction automatique

Traduction automatique

Vi præsenterer her, en detaljeret procedure for en nyligt udviklede protease assay platform udnytter N-terminale hexahistidine/maltose-bindende protein og fluorescerende proteiner-smeltet rekombinant substrater knyttet til overfladen af nikkel-nitrilotrieddikesyre syre magnetiske Agarosen perler. En efterfølgende i-gel analyse af assay prøverne adskilt af sodium dodecyl sulfat-polyacrylamid gelelektroforese er også præsenteret.

Tags

Recombinant Fusion ProteinsFluorescent Protease AssayIn-gel RenaturationHIV-1 ProteaseHigh-throughput ScreeningFluorescence-based AssayProtein ExpressionCleavage SiteBL21(DE3) CellsPlasmid Construction

Article

Embed

AJOUTER À LA PLAYLIST

Usage Statistics

Vidéos Connexes

check_url/fr/58824?article_type=v

Meget følsom og kvantitativ påvisning af proteiner og deres isoformer af kapillar isoelektrisk fokusering metode
check_url/fr/58824?article_type=v

En høj overførselshastighed Luciferase Assay at evaluere proteolyse af Single-omsætning Protease PCSK9
check_url/fr/58824?article_type=v

Isolering af fysiologisk aktive tylakoiderne og deres anvendelse i energiafhængige Protein Transport Assays
check_url/fr/58824?article_type=v

Hvordan man kan kvantificere brøkdel af Photoactivated fluorescerende proteiner i Bulk og i levende celler
check_url/fr/58824?article_type=v

Fluorescerende sølv farvning af proteinerne i polyacrylamidgeler
check_url/fr/58824?article_type=v

Lokalisering af SUMO-modificerede proteiner ved hjælp af fluorescerende Sumo-diffuse Rings proteiner
check_url/fr/58824?article_type=v

Måling af interaktioner mellem fluorescerende sonder og lignin i plante sektioner af sFLIM baseret på naturlig Auto Luorescens
check_url/fr/58824?article_type=v

Karakteriserecellulære proteiner med in-cell hurtig fotokemisk oxidation af proteiner
check_url/fr/58824?article_type=v

Tværgående 2000 af ældre ris(Oryza sativa L.) Kerner til scanning elektronmikroskopi imaging ved hjælp af pipette tips som immobilisering Support
check_url/fr/58824?article_type=v

Platforminkubator med bevægelig XY-fase: En ny platform til implementering af in-cell hurtig fotokemisk oxidation af proteiner

Read Article