This content is Free Access.
Chapitres
- 00:04Titre
- 01:45Positive and Negative Screening for Evolving Cas9
- 04:47Delivery of Cas9 as an RNP with Truncated sgRNA
- 06:17RNP Delivery
- 07:27Transfection of Plasmids Encoding Sniper-Cas9 and sgRNA
- 09:01Targeted Deep Sequencing for the Analysis of On-target and Potential Off-target Sites
- 09:29Results: Analysis of Sniper-screen, On-target and Off-target Activities
- 10:37Conclusion
Här presenterar vi ett protokoll för att optimera CRISPR-Cas9 för att uppnå en högre specificitet utan förlust av på målet aktivitet. Vi använder en riktad evolution strategi kallas Sniper-skärmen för att hitta en mutant Cas9 med de önskade egenskaperna. Sniper-Cas9 är kompatibel med trunkerade singel-guide RNAs och leverans i ribonukleoprotein format, välkända strategier för att uppnå högre särdrag.
