Name: Vasküler Endotel Hücrelerini Doğrudan Gözlemlemek Için En Yüz İmmünofloresan Boyama (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2019-08-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 6 s
Description: Keşfedin, fare aortasındaki vasküler endotel hücrelerini doğrudan gözlemlemek için en yüz immünofloresan boyama yöntemini. Bu teknik, ateroskleroz gelişimiyle ilişkili farklı akış kayma gerilimi koşullarında hücresel ve moleküler fenotipi analiz etmek için etkilidir.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Bu çalışma Çin Ulusal Doğa Bilimleri Vakfı (Hibe No. 81670451, 81770430), Şangay Rising-Star Programı (Grant No. 17QA1403000) ve Şangay Belediye Hükümeti Bilim Teknolojisi Komitesi (Grant No. 14441903002, 15411963700).

Tüm hayvan deneyleri Şangay Jiao Tong Üniversitesi Hayvan Kaynakları Komitesi tarafından onaylanan deneysel protokollere uygun olarak yapılmıştır.
1. Fare aortu perfüzyonu
<ol><li>Kısaca, sodyum pentobarbital (50 mg /kg vücut ağırlığı) intraperitoneal enjeksiyonları ile 12 haftalık C57BL/6 fareler anestezik. Kuyruğu hafifçe çimdikleyerek uygun anesteziyi onaylayın. NOT: Herhangi bir hareket gözlenmezise, hayvan deneylere başlamak için yeterince anesteziye başlar.</li>
	<li>Farenin patilerini yapışkan bantlarla kağıt havlu yığınına bantlayın.</li>
	<li>Pİşir ile farenin deri tutun ve toraks üstüne karın makas bir çift ile deri kesti.</li>
	<li>Göğüs kafesinin altındaki karın boşluğunu keskin bir makasla açın.</li>
	<li>Sternumu forsepsle kaldırın ve diyaframı kesin; sonra, göğüs kafesini kesilerek göğüs boşluğunu ortaya çıkar.</li>
	<li>Vena kavasını karaciğerin hemen üstünde, makasla kes.</li>
	<li>Basınç perfuse (100 mmHg) akciğerler ve karaciğer soluk hale gelene kadar sol ventrikül ile 40 adet / mL heparin içeren önceden chilled normal tuzlu ile 5 dakika için arterağacı. Daha sonra, 3 dakika için fosfat tamponlu salin (PBS, pH 7.4) prechilled% 4 paraformaldehit ile perfuse.</li>
	<li>Aort maruz kalana kadar tüm kasları, organları ve yağ çıkarın.</li>
	<li>Fareyi bir kesme mikroskobunun altına yerleştirin.</li>
</ol>2. Aortun diseksiyonu ve uzunlamasına açılması
<ol><li>Aortu bir diseksiyon mikroskobu altında açıkça ortaya çıkarın ve aort boyunca bağ dokularını mümkün olduğunca temiz, hassasçerterler ve bir çift hassas makas ile çıkarın (Şekil 1).</li>
	<li>Bir çift hassas makasla kalpten çölyak gövdesine kadar göğüs aortu inceltin ve PBS ile 6 cm hücrekültür çanak içine aort koyun. Düz segment karşılanana kadar aort uzunlamasına, daha küçük eğri boyunca ve daha büyük eğri boyunca açın. Şekil2'de gösterildiği gibi, aort kemerinin üç dalını, innominate de dahil olmak üzere, sol ortak karotis ve sol subklavian arteri mikrosiküllü olarak kesin.</li>
</ol>3. Aortun ön tedavisi ve immünboyamı
<ol><li>10 dakika PBS%0.1 polioksietilen oktil fenil eter ile aortu permeabilize edin ve 12 kuyulu hücre kültür plakasında oda sıcaklığında %2,5 polisorbat 20'ye 1 saat oda sıcaklığında bulunan Tris-tamponlu salin (TBS) %10 normal keçi serumu ile engelleyin.</li>
	<li>Daha sonra, 5 g/mL tavşan anti-VCAM-1 ve 5 g/mL sıçan anti-VE-kadherin ile aort inkübülmesi engelleme tampon, bir gecede 4 °C.</li>
	<li>Numuneyi yıkama solüsyonuyla 3x duruladıktan sonra (%2,5 polisorbat içeren TBS 20), floresan konjuge ikincil antikorları (1:1.000 seyreltme, Alexa Fluor 555 etiketli anti-tavşan IgG ve Alexa Fluor 488 etiketli anti-rat IgG) 1 saat boyunca odada uygulayın Sıcaklık. Yıkama çözeltisinde 3 x durulayın.</li>
	<li>4',6-diamidino-2-fenilindole (DAPI) (1 μg/mL) ile aort le karşı leke 10 dakika ve yıkama çözeltisinde 3x durulayın.</li>
</ol>4. Aortun cam kaydırağa montajı
<ol><li>Aortu, parlak yüzeyi aşağı doğru bir kapak kaymasına yerleştirin ve daha önce kapak kayması üzerine bırakılan antifade montaj çözeltisine yavaşça hareket ettirin. Numuneyi düz tutmak için aortu hafifçe gerin.</li>
	<li>Kapak kayma ters ve slayt cam üzerine koyun. Numune ve cam arasında herhangi bir hava kabarcığı kalmasına izin vermemeye özen gerekir.</li>
</ol>5. Aort gözlemi
<ol><li>Bir lazer tarama konfokal mikroskop ile aort inceleyin.</li>
	<li>Image-Pro Plus yazılımı ile en yüz görüntülerinde istenilen bölgeden farklı kanalların renk yoğunluklarını analiz edin.</li>
</ol>

<ol><li>Gimbrone, M. A. Jr, Garcia-Cardena, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Endothelial+Cell+Dysfunction+and+the+Pathobiology+of+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Endothelial Cell Dysfunction and the Pathobiology of Atherosclerosis.</a> Circulation Research. 118 (4), 620-636 (2016).</li>
<li>Zhou, J., Li, Y. S., Chien, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear+stress-initiated+signaling+and+its+regulation+of+endothelial+function%5BTitle%5D)+AND+%22Arteriosclerosis%2C+Thrombosis%2C+and+Vascular+Biology%22%5BJournal%5D)">Shear stress-initiated signaling and its regulation of endothelial function.</a> Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 34 (10), 2191-2198 (2014).</li>
<li>Tarbell, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Shear+stress+and+the+endothelial+transport+barrier%5BTitle%5D)+AND+%22Cardiovascular+Research%22%5BJournal%5D)">Shear stress and the endothelial transport barrier.</a> Cardiovascular Research. 87 (2), 320-330 (2010).</li>
<li>Warren, B. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+the+production+of+%26%2334%3Ben+face%26%2334%3B+preparations+one+cell+in+thickness%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Microscopy%22%5BJournal%5D)">A method for the production of &#34;en face&#34; preparations one cell in thickness.</a> Journal of Microscopy. 85 (4), 407-413 (1965).</li>
<li>Azuma, K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+new+En+face+method+is+useful+to+quantitate+endothelial+damage+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">A new En face method is useful to quantitate endothelial damage in vivo.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 309 (2), 384-390 (2003).</li>
<li>Son, D. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+atypical+mechanosensitive+microRNA-712+derived+from+pre-ribosomal+RNA+induces+endothelial+inflammation+and+atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Communications%22%5BJournal%5D)">The atypical mechanosensitive microRNA-712 derived from pre-ribosomal RNA induces endothelial inflammation and atherosclerosis.</a> Nature Communications. 4, 3000(2013).</li>
<li>Go, Y. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Disturbed+flow+enhances+inflammatory+signaling+and+atherogenesis+by+increasing+thioredoxin-1+level+in+endothelial+cell+nuclei%5BTitle%5D)+AND+%22PLOS+ONE%22%5BJournal%5D)">Disturbed flow enhances inflammatory signaling and atherogenesis by increasing thioredoxin-1 level in endothelial cell nuclei.</a> PLOS ONE. 9 (9), e108346(2014).</li>
<li>Kundumani-Sridharan, V., Dyukova, E., Hansen, D. E. 3rd, Rao, G. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((12%2F15-Lipoxygenase+mediates+high-fat+diet-induced+endothelial+tight+junction+disruption+and+monocyte+transmigration%3A+a+new+role+for+15%28S%29-hydroxyeicosatetraenoic+acid+in+endothelial+cell+dysfunction%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">12/15-Lipoxygenase mediates high-fat diet-induced endothelial tight junction disruption and monocyte transmigration: a new role for 15(S)-hydroxyeicosatetraenoic acid in endothelial cell dysfunction.</a> The Journal of Biological Chemistry. 288 (22), 15830-15842 (2013).</li>
<li>Liu, Z. H., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((C1q%2FTNF-related+protein+1+promotes+endothelial+barrier+dysfunction+under+disturbed+flow%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemical+and+Biophysical+Research+Communications%22%5BJournal%5D)">C1q/TNF-related protein 1 promotes endothelial barrier dysfunction under disturbed flow.</a> Biochemical and Biophysical Research Communications. 490 (2), 580-586 (2017).</li>
<li>Wang, X. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Thioredoxin+interacting+protein+promotes+endothelial+cell+inflammation+in+response+to+disturbed+flow+by+increasing+leukocyte+adhesion+and+repressing+Kruppel-like+factor+2%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Thioredoxin interacting protein promotes endothelial cell inflammation in response to disturbed flow by increasing leukocyte adhesion and repressing Kruppel-like factor 2.</a> Circulation Research. 110 (4), 560-568 (2012).</li>
<li>Mitra, S., Deshmukh, A., Sachdeva, R., Lu, J., Mehta, J. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Oxidized+low-density+lipoprotein+and+atherosclerosis+implications+in+antioxidant+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22The+American+Journal+of+the+Medical+Sciences%22%5BJournal%5D)">Oxidized low-density lipoprotein and atherosclerosis implications in antioxidant therapy.</a> The American Journal of the Medical Sciences. 342 (2), 135-142 (2011).</li>
<li>Stancel, N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Interplay+between+CRP%2C+Atherogenic+LDL%2C+and+LOX-1+and+Its+Potential+Role+in+the+Pathogenesis+of+Atherosclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clinical+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Interplay between CRP, Atherogenic LDL, and LOX-1 and Its Potential Role in the Pathogenesis of Atherosclerosis.</a> Clinical Chemistry. 62 (2), 320-327 (2016).</li>
<li>Nerem, R. M., Levesque, M. J., Cornhill, J. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+Endothelial+Morphology+as+an+Indicator+of+the+Pattern+of+Blood+Flow%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Biomechanical+Engineering%22%5BJournal%5D)">Vascular Endothelial Morphology as an Indicator of the Pattern of Blood Flow.</a> Journal of Biomechanical Engineering. 103 (3), 172-176 (1981).</li>
</ol>

Yazarların açıklayacak bir şeyi yok.

Endotel lipidler, inflamatuar mediatörler ve sıvı kesme stresi1,11,12dahil olmak üzere çok sayıda proaterojenik faktörlere maruz kalmaktadır. Yerinde endotel hücrelerinin doğrudan gözlem hücre morfolojisi değişiklikleri analiz etmek için özel avantajlar sağlar, hücreler arası kavşaklar, ve yaralanma uyaranlarına yanıt molekül ekspresyon desenleri.
Önceki çalışmalar arteriyel duvar endotel gözlemlemek ...

Vaskülatürerken erken değişiklikler öncelikle endotel, hangi hücreler arası sıkı kavşak kompleksleri ile kan ve damar duvarı arasında seçici bir bariyer olarak işlev ler başlatın1. Önemli kanıtlar endotel fonksiyonu2modülasyonunda kan akışının mekanik etkileri için kritik bir rol işaret ediyor. Sıvı kesme stresi, kan akımı tarafından oluşturulan bir sürtünme kuvveti, farklı damar hücre morfolojisi ve fonksiyonu ayırt edici şekillerde, farklı vasküler sitelerde belirli akış paradigmaları bağlı olarak2,3. Aterosklerotik lezyonlar tercihen rahatsız kan akımı bölgelerinde meydana (d-akış), damar eğrilikleri gibi, akış bölücüler, ve şube noktaları, sabit akış bölgeleri ile karşılaştırıldığında (s-akış), arter in düz segment gibi. Bu nedenle, endotel morfolojisi ve molekül ekspresyonu desenlerinin doğrudan gözlemi, değişen akış paradigmaları altında endotel hücrelerinin yapısal ve fonksiyonel fenotiplerine önemli bilgiler sağlamalıdır.
Kültürlü endotel hücreleri, sıvı kesme stresinin, çevreleyen sitokinlerin ve hücre-hücre dışı matriks etkileşimlerinin etkisinin kaybolması nedeniyle kısmen in vivo'da yaptıkları gibi gerçek fenotipi ifade edemeyebilirler. Bu yardım için, bozulmamış endotel hücre monolayer klasik immünohistokimya kullanılarak enine kesitler üzerinde incelenebilir. Ancak, endotel monolayer genellikle açıkça gözlemlenemez o kadar ince ve kırılgandır. En yüz immünohistokimya endotel iç yüzeyini gözlemlemek için kullanılmıştır ama endotel kolayca altta yatan doku dan sıyrılmış çünkü sonuçları ya karmaşık ya da düzensiz, ya da sıçan veya tavşan arteriyel duvarın sadece bir parçası, kimin duvarları kalın,4,5monte edilir.
Fare modelleri birçok açıdan diğer hayvanlara göre önemli avantajlara sahiptir. Burada C57BL/6 farede aort kemeri ve torasik aortun endotel hücrelerini analiz etmek için modifiye edilmiş bir en yüz immünofloresans tekniği ni uyguluyoruz. Böyle bir teknik yaygın olarak farklı akış desenleri endotel patofizyolojisi çalışma ve aterosklerozgelişiminde6,7,8,9,10kullanılmıştır. Bu yöntem bilim adamlarının endotel yüzeyinin tamamını net bir şekilde gözlemlemelerine ve farklı sıvı kesme stresi altındaki bölgelerde belirli bir proteinin ifade desenlerini karşılaştırmalarına olanak tanır.

<table><tbody><tr><td>Antifade mountant</td><td>Servicebio</td><td>G1401</td><td></td></tr><tr><td>Hassas Forseps</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>F11001-11</td><td></td></tr><tr><td>Hassas Makas</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>S12003-09</td><td></td></tr><tr><td>Diseksiyon Forseps</td><td>RWD Yaşam Bilimleri</td><td>F12005-10</td><td></td></tr><tr><td>Mciro Yaylı Makas</td><td>RWD Yaşam</td><td>Bilimleri S11001-08</td><td></td></tr><tr><td>Polioksietilen oktil fenil eter (Triton X-100)</td><td>Amresco</td><td>M143</td><td></td></tr><tr><td>Polisorbat 20 (Tween 20)</td><td>Amresco</td><td>0777</td><td></td></tr><tr><td>VCAM-1 antikoru</td><td>Abcam</td><td>ab134047</td><td></td></tr><tr><td>VE-Cadherin antikoru</td><td>BD Biosciences</td><td>555289</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 555 etiketli anti-tavşan IgG</td><td>invitrojen</td><td>A-31572</td><td></td></tr><tr><td>Alexa Fluor 488 etiketli sıçan önleyici IgG</td><td>invitrogen</td><td>A-21208</td><td></td></tr><tr><td>Lazer Tarama Mikroskobu&nbsp;</td><td>Carl Zeiss</td><td></td><td></td></tr></tbody></table> ·

vasküler endotel hücrelerini doğrudan gözlemlemek için en yüz İmmünofloresan boyama

Using En Face Immunofluorescence Staining to Observe Vascular Endothelial Cells Directly

Endotel fenotip ve morfolojideki anormal değişiklikler ateroskleroz patogenezinde ilk olaylar olarak kabul edilir. Bozulmamış endotel doğrudan gözlem işlevsiz endotel hücrelerinde hücresel ve moleküler olayları anlamak için değerli bilgiler sağlayacaktır. Burada, bilim adamlarının bozulmamış endotel yüzeyinin net görüntülerini elde etmelerini ve molekül ekspresyon desenlerini yerinde analiz etmelerini sağlayan değiştirilmiş bir yüz immünofloresans boyama tekniğini tanımlıyoruz. Yöntem basit ve aort farklı sitelerde tüm endotel monolayer gözlemlemek için güvenilir. Bu teknik, özellikle erken bir aşamada, ateroskleroz patofizyolojisi anlamak için umut verici bir araç olabilir.

12 haftalık Bir C57BL/6 fare ötenazi ve 40 adet / mL heparin içeren normal tuzlu ile perfüzyon ve daha sonra, prechilled 4% paraformaldehit. Fare aort bir diseksiyon mikroskobu altında maruz kaldı (Şekil1), diseksiyon, ve uzunlamasına açık kesilmiş (Şekil 2). Vasküler endotel hücrelerinin en yüz immünoreskence boyaması Şekil 3 ve Tablo1'de gösterildiği gibi yapılmıştır. En yüz immüno...

Burada, doğrudan fare aort endotel hücrelerini gözlemlemek için immünofloresan boyama için bir protokol sıyoruz. Bu teknik, endotel hücrelerinin farklı akış desenlerinde hücresel ve moleküler fenotiplerini incelerken ve ateroskleroz gelişiminde yararlıdır.

Vasküler Endotel Hücrelerini Doğrudan Gözlemlemek Için En Yüz İmmünofloresan Boyama

Aberrant changes in endothelial phenotype and morphology are considered to be initial events in the pathogenesis of atherosclerosis. Direct observation of ...

Bu protokol insanların endotel hücre morfolojisini ve bölgelerdeki moleküllerin farklı sıvı kesme stresi altında ifade sini analiz lerine yardımcı olur. Bu tekniğin en büyük avantajı, farklı sıvı kesme stresi altında vasküler endotel hücrelerinin doğrudan değerlendirilmesi sağlar. Bu işlemi gerçekleştirirken, önemli adımlar taze hazırlanmış paraformaldehit kullanmak ve iyi bir perfüzyon gerçekleştirmek için vardır.Bu yordamı, metin protokolünde açıklandığı gibi 12 haftalık bir C57BL/6 farenin anestezisi ile başlayın. Kuyruğu hafifçe çimdikleyerek uygun anesteziyi onaylayın. Farenin patilerini yapışkan bantla kağıt havlu yığınına bantlayın.Pİşir ile farenin deri tutun ve toraks üstüne karın makas bir çift ile deri kesti. Karın boşluğuaçın, göğüs kafesinin altında, keskin bir makas ile. Göğüs kafesini forsepsle kaldırın ve diyaframı kesin.Sonra göğüs kafesini kesip göğüs boşluğunu ortaya çıkar. Vena kavasını karaciğerin hemen üstündeki makasla kesin. Basınç beş dakika boyunca arterağacı perfuse, mililitre heparin başına 40 birim içeren önceden soğutulmuş normal salin ile, sol ventrikül yoluyla, akciğerler ve karaciğer soluk hale gelene kadar.Daha sonra PBS'de önceden soğutulmuş %4 paraformaldehit ile dört dakika perfuse. Aort maruz kalana kadar tüm kasları, organları ve yağları çıkarın. Fareyi bir kesme mikroskobunun altına yerleştirin.Hassas forceps ve hassas makas bir çift açıkça bir diseksiyon mikroskop altında aort ortaya çıkarmak için kullanın, ve aort boyunca bağ dokusu kaldırmak, mümkün olduğunca temiz. Bir çift hassas makasla kalpten çölyak gövdesine kadar göğüs aortunu inceleyin. Aortu PBS ile altı santimetrelik hücre kültürü yemeğine yerleştirin.Kesme aort uzunlamasına açık, ilk küçük eğri boyunca, ve daha sonra aort kemer üç dalları açmak için mikroskalsors kullanın, innominate dahil olmak üzere, ortak karotis sol, ve düz segment karşılanana kadar büyük eğri boyunca sol subklavian arter. 10 dakika PBS% 1 polioksietilen sekizli fenil eter ile aort permeabilize. Daha sonra 12 iyi hücre kültür plaka, oda sıcaklığında bir saat için% 2.5 polisorbat 20 içeren tris-tamponlu tuzlu% 10 normal keçi serumu ile aort bloke.Sonraki mililitre tavşan anti-VCAM1 başına beş gram içeren engelleme tampon aort kuluçka, ve mililitre sıçan anti-VE-Cadherin başına beş gram, dört derece santigrat gecede. Numuneyi yıkama solüsyonuyla üç kez duruladıktan sonra, floresan konjuge ikincil antikorları oda sıcaklığında bir saat boyunca uygulayın ve karanlık bir yerde tutarak. Yıkama çözeltisini üç kez daha durulayın.Aortu DAPI ile 10 dakika boyunca ters boyayın, karanlık bir yerde tutarak. Daha sonra lekeli aortu üç kez yıkadıktan sonra durulayın. Aortu lümenal yüzeyi aşağı doğru bir kapak kaymasıüzerine yerleştirin ve daha önce kapak fişinin üzerine düşmüş olan antifade montaj çözeltisine yavaşça yerleştirin.Numuneyi düz tutmak için aortu hafifçe gerin. Kapak fişini ters çevirin ve cam kaydırak üzerine koyun. Numune ve cam arasında herhangi bir hava kabarcıkları önlemek için dikkat edin.Bir lazer tarama konfokal mikroskop ile aort inceleyin. Image-Pro Plus yazılımı ile en face görüntülerinde istenilen bölgeden farklı kanalların renk yoğunluklarını analiz edin. En yüz immünofloresans fare aort vasküler endotel hücrelerinin boyama görüntüleri gösterilir.En yüz immünofluoresence vasküler hücre ahezyon proteini bir, ve ve-Kadherin ile bir endotel belirteci olarak ifade, fare aort farklı bölgelerinden değişen akış desenleri altında gösterilir. DAPI da daha iyi görselleştirme için hücre çekirdekleri göstermek için counterstained oldu. Mikroskop altında Z yığınları ile bakarken, endotel ve düz kas hücreleri kolayca hücre çekirdeği morfolojisi ile ayırt edilebilir.Endotel hücre çekirdekleri oval şekilli ve mil şeklinde daha büyük, düz kas hücre çekirdekleri. VCAM-1'in ekspresyonu, aksat kemerinin daha az eğrilik altında, aort kemerinin daha az eğrilikaltında, aort kemerinin daha büyük eğriliğinde ve torasik aortta daha fazla eğrilik te ve bozuk aortta daha fazla olduğu görüldü. Burada fare aortunun daha az eğrilik alanları d-akış alanları olarak gösterilir ve daha büyük eğrilik ve torasik.Doğru modifikasyon ile bu teknik vasküler geçirgenliğin analizine ve endotel hücre intimasında makromoleküllerin konumuna da uygulanabilir.

using-en-face-immunofluorescence-staining-to-observe-vascular

Research

JoVE Journal

Biology

Biyoloji

GFP-aktin ifade canlı endotel hücreleri mikroskobik görüntüleme iskelet yapıları dinamik değişimlere karakterizasyonu sağlar. Sabit örneklerinde kullanan teknolojilerden farklı olarak, bu yöntem önce aynı hücrelerde aktin hücre iskeletinin temporal değişikliklerin ayrıntılı bir değerlendirme sırasında, çeşitli fiziksel, farmakolojik veya inflamatuvar uyaranlara sonra sağlar.

GFP-Aktin ifade Canlı Endotel Hücreleri Aktin Sitoiskelet Çalışması

Bu video, T lenfositleri ile floresan antijenleri taşıyan epitel hücreleri arasındaki etkileşimleri araştıran immünolojik sinaps topolojisinin canlı hücre görüntülemesini göstermektedir. Floresan mikroskobu, endotel hücrelerinde kırmızı sitoplazma yer değiştirmesini ve sarı zar halkalarını ortaya çıkarır ve bu da immünolojik sinapsların oluşumunu gösterir.

Canlı Hücre Görüntüleme ile İmmünolojik Sinaps Topolojisinin Değerlendirilmesi

Kaynak: Gucciardo, E., et. al., Proliferatif Diyabetik Retinopatide Fibrovasküler Komplikasyonlar için Ex Vivo Doku Kültürü Modeli. (2019)Bu video, fibrin jel içine gömülü fibrovasküler dokunun ex vivo kültürleri için bir immün boyama protokolünü detaylandırmaktadır. Bu, proliferatif diyabetik retinopati ile ilişkili vasküler değişikliklerin ayrıntılı olarak görselleştirilmesini...

Jel Gömülü Hasta Kaynaklı Hastalıklı Fibrovasküler Dokunun İmmünofloresan Boyanması

Kaynak: Alluri, H.,  et al. Kan-Beyin Bariyeri Disfonksiyonunu İncelemek İçin İn Vitro İskemi-Reperfüzyon Yaralanma Modeli Olarak Oksijen-Glikoz Yoksunluğu ve Reoksijenasyon. J. Vis. Uzm. (2015). Video, sıçan beyni mikrovasküler endotel hücrelerinde (RBMEC'ler) sıkı bağlantı proteinlerinin ve stres liflerinin floresan lokalizasyonunu göstermektedir. Stresli tek tabakada, sıkı bağlantı proteinlerini etiketlemek için floresan etiketli antikorlar kullanılırken, florofor etiketli falloidin stres...

Endotel Hücrelerinde Sıkı Bağlantı Proteinlerinin ve Stres Liflerinin Floresan Lokalizasyonu

Bizim rapor fizyolojik akış koşulları altında prostat kanserinde CTC / EC etkileşimleri görselleştirmek ve analiz etmek için eşsiz bir yöntem açıklanır.

Hastalar ve İnsan endotel hücrelerinden türetildiği Prostat dolaşımdaki tümör hücrelerinin arasında E-selektin aracılı Etkileşimleri gözlemleyin vitro Yöntemi

Lökositler paraselüler veya transselüler yolu kullanarak endotel tek tabaka çapraz. Biz endojen junctional dağıtım VE-kaderin ve PECAM-1 lökosit transendotelyal göç sırasında fizyolojik akış altında iki âlemden yolları arasında ayrım için takip basit bir deney geliştirildi.

Nötrofil Hicret altında Fizyolojik Akış sırasında endotel hücre-hücre Eklemlerinin Gerçek zamanlı Görüntüleme

Adaptif bağışıklık, T hücreleri ile antijen sunan hücreler arasında oluşan dinamik 'immünolojik sinapslar' tarafından kontrol edilir. Bu protokol, endotel hücrelerinin hem az çalışılmış fizyolojik APC'ler hem de yeni bir 'düzlemsel hücresel APC modeli' türü olarak araştırılması için yöntemleri tanımlar.

Görüntüleme İmmünoloji Synapse Dynamics için bir Endotel Hücre Modeli Düzlemsel

Bu yazıda floresan boya tr yüz eşzamanlı algılama ve hücre içi nitrik oksit görselleştirme (NO) ve süperoksit anyon (O 2 diaminofluorescein-2 diasetat (DAF-2DA) ve dihydroethidium (DHE) kullanarak adapte nispeten kolay bir yöntem tarif .- ) sırasıyla, taze bir obezite fare modelinin sağlam aorta izole edilmiştir.

Bozulmamış Arterlerin endotel katmanı Nitrik Oksit ve Süperoksit En Yüz Algılama

Biz matris jel fiş anjiyogenez testinin bir varyasyon kullanarak fare insan endotel-pericyte etkileşimleri incelemek için bir protokol mevcut.

Fare Matrix Jel Plug Test kullanma İnsan endotel-pericyte Etkileşim Vivo Çalışmasında

Bu iletişim kuralı transgenik fareler hücre özgü floresan işaretleri ifade intravital görüntüleme açıklar. İntravital görüntüleme implante edilebilir windows üzerinden süreçlerin mikroskobik görselleştirme mümkündür kullanarak yaşayan hayvanlarda yüksek çözünürlüklü gözlemler için non-invaziv bir yöntem sağlar. Bu yöntem boyuna işlemleri incelemek özellikle kullanışlıdır.

Tümör ilişkili damarlara kullanmanın intravital mikroskobu gelişmiş Dorsal deri kıvrım pencere Chambers transgenik floresan fareler üzerinde

Fare karotid arteri ve aortanın yüz öncesi hazırlıkları yapmak için bir prosedür anlatılmıştır. Bu preparatlar, immünofloresan olarak spesifik antikorlarla boyandığında, konfokal mikroskopi ile proteinlerin lokalizasyonu ve tüm vasküler duvar içindeki hücre tiplerinin tanımlanmasını sağlar.

Fare Kan Gemilerinin Yüz Yüzey Hazırlığı

Keşfedin, fare aortasındaki vasküler endotel hücrelerini doğrudan gözlemlemek için en yüz immünofloresan boyama yöntemini. Bu teknik, ateroskleroz gelişimiyle ilişkili farklı akış kayma gerilimi koşullarında hücresel ve moleküler fenotipi analiz etmek için etkilidir.

Vasküler Endotel Hücrelerini Doğrudan Gözlemlemek Için En Yüz İmmünofloresan Boyama

Daha fazla video keşfet