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Die Kombination von nicht-reduzierender SDS-PAGE-Analyse und chemischer Vernetzung mit Detect Multimerischen Komplexen, die durch Disulfide Linkages in Mammalian Cells in Culture stabilisiert wurden
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Chapitres
- 00:04Titre
- 00:34Harvesting Cells After Blocking Free Cysteine Residues Using Iodoacetamide
- 02:02Extraction of Protein and Sample Preparation
- 03:13In Vivo Formaldehyde Cross-linking of Endogenous Proteins in U-2 OS Cells
- 04:30Fractionation of Nuclei
- 06:11Extraction of Protein and Sample Preparation
- 06:51SDS-PAGE Analysis
- 07:53Results: Analyzing Multimeric Complexes Using a Two-step Method of Non-reducing SDS-PAGE Analysis and Formaldehyde Cross-linking
- 09:04Conclusion
Die Verbindung von Disulfiden ist seit langem bekannt, um die Struktur vieler Proteine zu stabilisieren. Eine einfache Methode, um multimerische Komplexe zu analysieren, die durch diese Verknüpfungen stabilisiert werden, ist die Nicht-Remation der SDS-PAGE-Analyse. Hier wird diese Methode durch die Analyse der nuklearen Isoform von DUTPase aus der menschlichen Knochen osteosarcoma Zelllinie U-2 OS veranschaulicht.
