Identificación y disección de diversos depósitos de adipose de ratón

Una metodología estandarizada para identificar y diseccionar depósitos adiposos en todo el cuerpo es fundamental para la investigación de las diferencias en el carácter y la función de los adipocitos dentro de nichos anatómicos discretos. La principal ventaja de esta técnica es que es un método fiable y preciso para identificar y excitar los depósitos adiposos de roedores comunes y menos estudiados. Para la identificación y aislamiento de LA BAT interescapular, utilice tijeras de iris para cortar horizontalmente a lo largo del borde inferior del tejido subcutáneo anterior de un ratón eutanasiado siguiendo el borde natural del depósito.

Hacer dos incisiones verticales a lo largo de los bordes laterales del depósito siguiendo los bordes naturales del tejido. Utilice fórceps para voltear cuidadosamente el depósito para revelar el tejido adiposo marrón interescapular en forma de mariposa incrustado dentro del tejido adiposo blanco. A continuación, disecciona cuidadosamente el BAT lejos del WAT circundante.

Almacene los tejidos adiposos en recipientes apropiados para el análisis posterior. Para la identificación y aislamiento de WAT subcutáneo posterior, coloque el ratón en la posición supina y asegure las extremidades del animal. Use fórceps para levantar la piel en la base del esternón y hacer una incisión cutánea de un milímetro.

Inserte una hoja de las tijeras de iris en el corte y haga una incisión de piel de línea media de cuatro a cinco centímetros comenzando en la base del esternón y ascendiendo a la base de la cola. A continuación, haga dos incisiones horizontales de un centímetro en la parte superior de la incisión vertical inicial que se extiende lateralmente desde la línea media. Utilice los fórceps para pelar cuidadosamente la piel de la cavidad peritoneal, utilice la pierna para localizar el WAT subcutáneo posterior que debe permanecer asociado con la piel.

Ancle la piel extendida y excediendo completamente el depósito triangular inguinal WAT de la base del extremo trasero ventralmente a través de la ingle. Para la identificación y aislamiento visceral del depósito WAT, utilice fórceps para levantar la delgada pared de cavidad peritoneal en la base del esternón y hacer una incisión de un milímetro en el tejido de la tienda. Inserte una hoja de las tijeras de iris en el corte y haga una incisión vertical descendente de cuatro a cinco centímetros desde la parte superior de la cavidad peritoneal hasta el recto.

Haga dos incisiones horizontales de un centímetro en la parte superior e inferior de la incisión vertical que se extienden lateralmente desde la línea media y utilice los fórceps para pelar el peritoneo para exponer el contenido de la cavidad abdominal. A continuación, ancle el peritoneo extendido a la bandeja de disección para cosechar los depósitos WAT contenidos dentro de la cavidad peritoneal. Para la identificación y aislamiento de WAT gonadal visceral, localice las gónadas y use fórceps para levantar el WAT gonadal asociado, luego use tijeras de iris para extirpar cuidadosamente el WAT de las gónadas.

Para extirpar el depósito perirenal, localice el riñón y use fórceps para levantar el tejido renal. Tire del riñón a la línea media para ver una clara división entre los depósitos perirenales y retroperitoneales e inscite el WAT directamente asociado con los riñones. Luego retire las glándulas suprarrenales ubicadas por encima de los riñones de la WAT.

Para la identificación retroperitoneal WAT y el aislamiento, levante el riñón a la línea media de nuevo y utilice tijeras de iris para diseccionar cuidadosamente el WAT retroperitoneal de la pared peritoneal posterior. Para aislar el WAT popliteal, coloque la rótula contra la sartén de disección teniendo cuidado de que la fosa popliteal en la parte posterior de la rodilla esté mirando hacia arriba. Utilice las tijeras de iris para eliminar cuidadosamente la piel de la base de la extremidad posterior al pie.

Utilice las tijeras de iris para hacer un corte en el borde inferior de las cabezas mediales y laterales del músculo gastrocnemius, utilizar los fórceps para levantar el músculo para revelar el depósito popliteal triangular. Luego usa tijeras de iris para extirpar el depósito a lo largo de los bordes del tejido natural. Aquí se muestran las ubicaciones anatómicas brutas de los depósitos subcutáneos, marrones, viscerales y popliteales de ratón.

Las características histológicas de los depósitos adiposos subcutáneos, marrones, viscerales, popliteales, constitutivos y regulados de médula adiposa, intramuscular e infrapatelar pueden evaluarse mediante protocolos estándar de tinción de Hematoxilina y Eosina. Los tejidos adiposos aislados mediante este protocolo se pueden utilizar para una amplia variedad de variables experimentales, incluyendo análisis histológicos, estudios moleculares y análisis de expresión de genes y proteínas. La estandarización en todo el campo de la identificación de diversos depósitos adiposos sin duda nos ayudará a profundizar en nuestra comprensión de sus características moleculares y metabólicas y sus contribuciones diferenciales a los estados patológicos locales y sistemáticos.