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Un ensayo semicuantitativo de estabilidad de objetivos sensibles a la afinidad de drogas (DARTS, por sus) para estudiar la interacción con Rapamicina/mTOR
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A Semi-Quantitative Drug Affinity Responsive Target Stability (DARTS) assay for studying Rapamycin/mTOR interaction
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Un ensayo semicuantitativo de estabilidad de objetivos sensibles a la afinidad de drogas (DARTS, por sus) para estudiar la interacción con Rapamicina/mTOR

DOI:
10.3791/59656-v

•

00:05 min

•

August 27, 2019

•

, , , ,
1Department of Orthopaedic Surgery,New York University Medical Center, 2Department of Cell Biology,New York University School of Medicine

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 00:47Collect and Lyse Cells
  • 01:59Incubate Protein Lysates with the Small Molecule and Perform Proteolysis
  • 03:28Western Blot Analysis
  • 03:59Results: Rapamycin Inhibition
  • 05:03Conclusion

Summary

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En este estudio, mejoramos las capacidades de análisis de datos del experimento DARTS mediante el seguimiento de los cambios en la estabilidad de las proteínas y la estimación de la afinidad de las interacciones proteína-ligand. Las interacciones se pueden trazar en dos curvas: una curva proteolítica y una curva de dependencia de dosis. Hemos utilizado la interacción mTOR-rapamicina como un caso ejemplar.

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DARTSDrug Affinity Responsive Target StabilityMTORRapamycinProtein-ligand InteractionProteolytic CurveDose-dependence Curve293T CellsCell LysisBCA AssayPronaseProtease Inhibitor CocktailSDS-PAGE

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