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富玛莱酸氢酶含含蛋白质的表达、纯化、结晶和酶测定
Journal JoVE
Biochimie
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Biochimie
Expression, Purification, Crystallization, and Enzyme Assays of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-Containing Proteins
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富玛莱酸氢酶含含蛋白质的表达、纯化、结晶和酶测定
DOI:
10.3791/59729-v
•
10:21 min
•
June 20, 2019
•
Alexander K. H. Weiss
2
,
Max Holzknecht
2
,
Elia Cappuccio
2
,
Ilaria Dorigatti
,
Karin Kreidl
,
Andreas Naschberger
,
Bernhard Rupp
,
Hubert Gstach
,
Pidder Jansen-Dürr
2
1
Research Institute for Biomedical Aging Research
,
University of Innsbruck Austria
,
2
Center for Molecular Biosciences Innsbruck (CMBI)
,
University of Innsbruck Austria
,
3
Division of Genetic Epidemiology
,
Medical University of Innsbruck Austria
,
4
Faculty of Chemistry, Department of Organic Chemistry
,
University of Vienna Austria
Chapitres
00:04
Titre
01:12
Expression of FAHD Proteins in Competent
E. coli
03:44
Lysis of Bacterial Pellets and Filtration of Debris
04:33
Purification of
His
-tagged FAHD Proteins using Ni-NTA Affinity Chromatography
05:59
Purification of FAHD Proteins via Ion Exchange Chromatography
06:35
Basic FAHD Activity Assays with Substrates Oxaloacetate and Acetylpyruvate
07:53
Results: Expression and Purification of Fumarylacetoacetate Hydrolase Domain-containing Proteins
09:19
Conclusion
Summary
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Traduction automatique
用实例描述了含紫酯水酶的表达和纯化(
在
大肠杆菌、FPLC中的表达)。纯化蛋白用于结晶和抗体生产,并用于酶测定。提出了选定的光度测定法,以显示FAHD1的多功能性,如牛酸脱碳酶和丙烯酰胺水酶。
Tags
Expression
Purification
Crystallization
Enzyme Assays
Fumarylacetoacetate Hydrolase
FHD Protein
TCA Cycle
Energy Metabolism
Mitochondria
Cellular Senescence
IPTG Induction
Affinity Chromatography
FPLC
BL21-DE3 PLysS E. Coli
LB Agar
NZCYM Medium
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