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CAS9タンパク質-gRNA複合体のエレクトロポレーションによるアクソロトル脊髄神経幹細胞の直接遺伝子ノックアウト
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Direct Gene Knock-out of Axolotl Spinal Cord Neural Stem Cells via Electroporation of CAS9 Protein-gRNA Complexes
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CAS9タンパク質-gRNA複合体のエレクトロポレーションによるアクソロトル脊髄神経幹細胞の直接遺伝子ノックアウト
DOI:
10.3791/59850-v
•
09:10 min
•
July 09, 2019
•
Wilson Pak-Kin Lou*
1,2
,
Liqun Wang*
3
,
Cheng Long
,
Lei Liu
,
Ji-Feng Fei
1
School of Life Sciences
,
South China Normal University
,
2
The Research Institute of Molecular Pathology (IMP)
,
Vienna Biocenter (VBC)
,
3
Institute for Brain Research and Rehabilitation (IBRR)
,
South China Normal University
Chapitres
00:04
Titre
01:16
CAS9-gRNA Ribonucleoprotein Mixture and Agarose Plate Preparation
02:33
Electroporator Configuration and Glass Microinjection Capillary Loading
04:09
Pneumatic Pump Configuration
04:37
CAS9-gRNA Ribonucleoprotein Mixture Injection
06:05
Electroporation
06:45
Knock-Out Efficiency Assessment
07:25
Results: Representative Knock-Out Effects in Axolotl Spinal Cord Neural Stem Cells
08:33
Conclusion
Summary
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ここに提示されるプロトコルは、CAS9-gRNA複合体を脊髄中央管に注入し、続いてエレクトロポレーションを行うことによって、軸総便脊髄の時間および空間制限遺伝子ノックアウトを行うプロトコルである。
Tags
Axolotl
Spinal Cord
Neural Stem Cells
Gene Knock-out
Electroporation
CAS9
GRNA
Regeneration
Molecular Mechanisms
Neural Stem Cell Function
Spinal Cord Injury
Agarose Electroporation Plate
Poring Pulse
Transfer Pulse
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