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Dinâmica de oligomerização dos receptores de superfície celular em células vivas pela microscopia de fluorescência de reflexão interna total combinada com análise de número e brilho
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Oligomerization Dynamics of Cell Surface Receptors in Living Cells by Total Internal Reflection Fluorescence Microscopy Combined with Number and Brightness Analysis

Dinâmica de oligomerização dos receptores de superfície celular em células vivas pela microscopia de fluorescência de reflexão interna total combinada com análise de número e brilho

DOI:
10.3791/60398-v

•

10:43 min

•

November 06, 2019

•

, , , ,
1Unit of Microscopy and Dynamic Imaging,Centro Nacional de Investigaciones Cardiovasculares (CNIC), Madrid, Spain, 2Centro di Imaging Sperimentale,Ospedale San Raffaele, Milan, Italy, 3Unit of Gynecological Oncology Research,European Institute of Oncology IRCCS, Milan, Italy

Chapitres

  • 00:04Titre
  • 01:48Sample Preparation
  • 02:38TIRF Imaging: Alignment of the Laser Line and Optimization of TIRF Illumination
  • 04:05TIRF Imaging: Capture of the Time Series
  • 05:46Number & Brightness (N&B): Quality Check of the Time Series
  • 06:34Number & Brightness (N&B): Computation of the B-values in Selected Region-of-interest (ROI)
  • 08:19Results: N&B Analysis and Kinetics of FGFR1 Oligomerization
  • 09:42Conclusion

Summary

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Descrevemos uma abordagem de imagem para a determinação do estado oligomérico médio de oligomeros de receptores marcados por mEGFP induzidos pela ligação de ligand na membrana plasmática das células vivas. O protocolo é baseado na microscopia de Fluorescência Total de Reflexão Interna (TIRF) combinada com análise de Número e Brilho (N&B).

Tags

Keywords: OligomerizationCell Surface ReceptorsTIRF MicroscopyNumber And Brightness AnalysisReceptor ClusteringFGFR1Fluorescence FluctuationLive Cell ImagingProtein OligomerizationCell Signaling

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