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Fluxo de trabalho de espectrometria de massa de imunoprecipitação sem rótulos para perfis de interactom nuclear em larga escala
Journal JoVE
Biochimie
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Journal JoVE Biochimie
Label-Free Immunoprecipitation Mass Spectrometry Workflow for Large-scale Nuclear Interactome Profiling
DOI:

11:19 min

November 17, 2019

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Chapitres

  • 00:04Titre
  • 01:07Preparation of Nuclear Extract
  • 03:45Immunoprecipitation of Endogenous Nuclear Bait Protein
  • 07:01Sample Preparation and LC/MS System Suitability
  • 09:09Results: A Single-bait Single-antibody IP-MS Experiment
  • 10:25Conclusion

Summary

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Descrito é um fluxo de trabalho proteômico para identificar parceiros de interação proteica de uma fração subcelular nuclear usando enriquecimento de imunoafinidade de uma determinada proteína de interesse e espectrometria de massa sem rótulo. O fluxo de trabalho inclui fracionação subcelular, imunoprecipitação, preparação de amostras auxiliadas por filtro, limpeza off-line, espectrometria de massa e um pipeline de bioinformática a jusante.

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