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Journal JoVE Génétique
A New Toolkit for Evaluating Gene Functions using Conditional Cas9 Stabilization

Um novo kit de ferramentas para avaliar funções genéticas usando estabilização condicional cas9

DOI:
10.3791/60685-v

•

08:20 min

•

September 02, 2021

•

,
1Cold Spring Harbor Laboratory, 2Faculty of Pharmacy,University of Ljubljana

Chapitres

  • 00:04Introduction
  • 01:00Lentiviral Preparation
  • 02:47Determining Virus Titer and Transduction Efficacy with Flow Cytometry
  • 04:27Lentiviral Transduction of Target Cells and Conditional Induction of Cas9 Mediated Gene Editing
  • 06:06Results: Analysis of Reversibility and Rapidity of Destabilized DD-Cas9 Protein
  • 07:24Conclusion

Summary

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Aqui, descrevemos uma ferramenta de edição de genomas baseada na estabilização temporal e condicional da re repetição palindômica curta interespaçada regularmente interespaçada ( CRISPR-) (Cas9) sob a pequena molécula, Shield-1. O método pode ser usado para células cultivadas e modelos animais.

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CRISPR-Cas9Gene EditingConditional Cas9 StabilizationShield-1Essential GenesTumor Survival GenesDD-Cas9In VivoIn VitroBlood-brain BarrierHEK293T CellsTransfectionVirus SupernatantVirus Titer

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